研究背景：动脉粥样硬化是一种动脉局部脂质沉积及慢性炎症改变的疾病，病变的形成与血脂代谢紊乱以及与其密切相关的炎症反应有直接的联系，Ⅱ型糖尿病患者是动脉粥样硬化的高危人群，具有发病早、病变范围广泛和程度严重的特点。糖尿病患者的血脂紊乱在动脉粥样硬化的发生和发展过程中起着重要作用，其特点为高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低、甘油三酯(TG)升高和小而致密的低密度脂蛋白增加。研究表明血浆HDL-C水平与糖尿病患者动脉粥样硬化的病变程度呈负相关，因而推测胆固醇逆转运系统功能的改变在动脉粥样硬化病变的发生和发展中起重要作用。但目前在此方面的研究相对缺乏，对糖尿病患者体内在动脉粥样硬化斑块形成中的主要细胞——巨噬细胞的功能改变，以及胆固醇在细胞内外的转运情况了解甚少。 研究目的：1.通过体外培养的人外周血单核细胞来源的巨噬细胞以及诱导的泡沫细胞，研究Ⅱ型糖尿病合并动脉粥样硬化的患者(Ⅰ组)三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCAl)介导的胆固醇外流，并与非糖尿病的动脉粥样硬化患者(Ⅱ组)和非动脉硬化症患者(Ⅲ组)进行比较，旨在了解糖尿病患者ABCAl介导的胆固醇外流的特点。 2.通过对体外培养的人外周血单核细胞来源并经过诱导后的泡沫细胞进行阿托伐他汀钙、非诺贝特酸、普罗布考三种药物的分别干预，探讨三种药物在Ⅱ型糖尿病合并动脉粥样硬化患者、非糖尿病的动脉粥样硬化患者和非动脉硬化症患者对其ABCA-l介导的胆固醇外流的影响。 研究方法：1.选择糖尿病外周动脉粥样硬化患者、非糖尿病外周动脉粥样硬化患者和非动脉硬化症患者。体外用自体血浆培养人外周血单核细胞来源的巨噬细胞。经由乙酰化低密度脂蛋白(Acl-LDL)的刺激充分诱导转变成泡沫细胞。 2.用细胞ELISA检测三组患者巨噬细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和ABCA-1的表达，以及经Acl-LDL刺激诱导后，泡沫细胞PPARα和ABCA-1表达的变化。 3.用高效液相色谱检测细胞内胆固醇，并计算细胞内胆固醇的外流率。 4.分别采用阿托伐他汀钙、非诺贝特酸、普罗布考加入三组患者巨噬细胞培养体系，观察对Acl-LDL吞噬能力、细胞内胆固醇外流率的影响。 结果：1.成功培养出人外周血单核细胞来源的巨噬细胞，并能充分诱导为泡沫细胞，经单核细胞-巨噬细胞系统特异标志CD68免疫组化染色鉴定为巨噬细胞，并经油红染色鉴定为吞噬大量脂质的泡沫细胞。 2.镜下观察，Ⅱ型糖尿病合并动脉粥样硬化组的单核细胞来源的巨噬细胞含脂质较多，在未用Acl-LDL诱导前已有较其他两组细胞更多的转变为含大量脂质的泡沫细胞。 3.自体血浆培养下三组患者的巨噬细胞PPARα和ABCAl表达没有显著区别。 4.自体血浆加入Acl-LDL培养后，三组患者的泡沫细胞PPARα和ABCAl的表达均显著降低(P均＜0.05)，Ⅰ组下降的程度最为明显，与Ⅲ组比较，组间有显著差异(P＜0.05)。 5.自体血浆培养与自体血浆加入Acl-LDL培养后细胞内总胆固醇(TC)的变化率(加入Acl-LDL前后TC差值/加入Acl-LDL前TC)，显示Ⅱ组(730.76±15.60％)＞Ⅰ组(674.87±53.17％)＞Ⅲ组(649.58±51.71％)的趋势，其中Ⅱ、Ⅲ组间有显著差异(P＜0.05)；细胞内胆固醇酯(CE)变化率在Ⅰ组(1979.74±314.27％)显著高于Ⅱ组(570.64±16.72％)和Ⅲ组(452.94±40.26％)(P均＜0.05)，Ⅱ组与Ⅲ组之间无显著区别(P＞0.05)。 6.镜下可见阿托伐他汀钙、非诺贝特酸和普罗布考对Acl-LDL引起的巨噬细胞损伤均有保护作用，其中阿托伐他汀钙的保护效果最好、起效最快。三种药物治疗均能显著抑制巨噬细胞对Acl-LDL的吞噬作用，并加速细胞内TC和CE的外流。 7.在三组患者中，药物干预后的PPARα和ABCAl的表达在非诺贝特酸治疗组较干预前明显升高(P＜0.05)，阿托伐他汀钙和普罗布考在干预前后对PPARα和ABCAl的表达没有明显影响。 8.在Ⅰ组，非诺贝特酸治疗引起的细胞内TC转运率明显高于阿托伐他汀钙和普罗布考的作用(P＜0.05)。在Ⅱ和Ⅲ组，三种药物对TC外流的影响无差别。 结论：1.Ⅱ型糖尿病合并动脉粥样硬化组的巨噬细胞内大量脂质沉积，其巨噬细胞对Acl-LDL有很强的吞噬能力。 2.Acl-LDL明显抑制巨噬细胞PPARα和ABCA-1的表达，在Ⅱ型糖尿病合并动脉硬化组最明显。 3.非诺贝特酸治疗在三组患者均能够明显上调PPARα和ABCA-1的表达，在Ⅱ型糖尿病合并动脉硬化组非诺贝特酸促进胆固醇外流的作用最显著。 4.阿托伐他汀钙、非诺贝特酸和普罗布考对Acl-LDL引起的的巨噬细胞损伤均有保护作用，其中阿托伐他汀钙的保护效果最好、起效最快。 5.阿托伐他汀钙、非诺贝特酸和普罗布考均可显著抑制巨噬细胞对Acl-LDL的吞噬作用，并加速细胞内TC和CE的外流。