论文部分内容阅读
蛋白酶是生物机体内大量存在的水解酶之一,在机体的新陈代谢中起着重要作用。蛋白酶的水解作用底物是蛋白质,然而在目前已有的测定、评价蛋白酶催化活性方法中所用的催化底物并非蛋白质,这就造成了测定或评价方法的准确性和可信度受到影响。本研究通过筛选,选用牛血清白蛋白(BSA)作为蛋白酶催化的直接底物,以SDS-PAGE测定了胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶等蛋白酶的活性,结果证明SDS-PAGE是一个能有效的评价蛋白酶催化活性等性质的新方法。而且,SDS-PAGE图谱分析能监控蛋白酶水解蛋白质的过程,有利于对蛋白酶作用性质的了解。本研究应用SDS-PAGE,优化了在不同温度、不同pH值条件下胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和酸性蛋白酶等蛋白酶的酶解反应,得出这几种蛋白酶水解反应的最适条件,且得出的条件与已有报道相吻合:1.胰蛋白酶水解最适宜温度为40°C,最适宜pH是pH 8.5-pH 8.7;2.木瓜蛋白酶水解最适宜温度为60°C,最适宜pH是pH 8.0;3.酸性蛋白酶最适宜温度为60°C,最适宜pH是pH 2.6-pH 3.6。同时,应用SDS-PAGE研究了胰蛋白酶抑制剂对于胰蛋白酶水解BSA的可能抑制机理,由SDS-PAGE图谱显示及分析胰蛋白酶、BSA和抑制剂的分子量等,推测胰蛋白酶抑制剂主要结合于胰蛋白酶的活性中心,阻止了胰蛋白酶与底物BSA的结合从而起到抑制作用。