研究背景和研究目的:干扰素是一类具有多种生物活性的细胞因子,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多重生物学作用。目前干扰素主要分为3大类,Ⅰ型干扰素即IFN-α、IFN-β;Ⅱ型干扰素IFN-γ;Ⅲ型干扰素即新型干扰素,IFN-ω、IFN-δ、IFN-ε和IFN-κ等。干扰素通过与细胞表面的干扰素受体结合,激活以JAK-STAT为主的信号传导通路,调控下游干扰素相关基因的表达,从而编码各种与生命活动相关的蛋白,达到抗病毒、抗肿瘤、免疫调控等作用。胰腺癌作为预后很差的实体肿瘤,手术是治疗胰腺癌的重要手段。据统计每年约有10%~20%的患者发现时尚处于早期阶段,对于早期诊断的胰腺癌患者首选手术治疗,而大部分患者确诊时已处于疾病中期或末期,无法进行手术。目前针对不能手术的胰腺癌患者尚缺乏有效的治疗手段。因此胰腺癌的患者预后很差。化疗成为胰腺癌的主要治疗方法,然而经过治疗仅能延长几个月的生存期,而且化疗的毒副作用非常明显,很多患者难以耐受。所以需要寻找有效的胰腺癌治疗方法。人们应用干扰素这种重要的免疫调节因子,治疗胰腺癌及其它肿瘤患者。但是由于其抗肿瘤作用有限,且毒副作用较大,临床应用受限。为了解决干扰素抗肿瘤作用弱、不良反应明显的缺点,我们尝试优化干扰素对肿瘤细胞增殖的抑制作用。研究方法:通过应用c DNA片段文库筛选技术,筛选出可以增强干扰素抑制胰腺癌细胞增殖的短肽（IEP）,之后构建IFNα+IEP的表达载体。然后利用慢病毒载体介导转染胰腺癌细胞,进行体外实验。最后探究SIFα的作用机制。（1）通过应用c DNA片段文库筛选技术,筛选出可以增强干扰素抑制胰腺癌细胞增殖的短肽-IEP。将其连接到IFNα的3’端合成新型的干扰素SIFα,通过慢病毒载体介导转染细胞,通过ELISA及Western Blot来检测表达载体的功能。（2）通过SRB检测SIFα对胰腺癌细胞增殖的影响。同时检测SIFα对胰腺癌细胞的细胞周期有无影响。（3）为了进一步证实SIFα对胰腺癌细胞的作用是通过分泌到细胞上清液中的干扰素发挥作用的,通过纯化细胞上清液中的SIFα、IFNα,用含有相同浓度的培养液处理胰腺癌细胞,检测胰腺癌ASPC和CFPAC1细胞的增殖情况。（4）然后利用RT-PCR及q PCR等技术检测干扰素相关基因的表达情况,如MX1、OAS2等。最后通过流式细胞术检测新型干扰素SIFα与胰腺癌细胞表面的干扰素受体的结合能力。研究结果:（1）应用c DNA片段文库筛选技术,发现了3个短肽可以增强干扰素抑制胰腺癌细胞增殖的作用,经过对比分析,这3个短肽有一段共同的序列,来源于胎盘生长因子-2（PLGF-2）的C端,我们称之为干扰素增强肽（IFN enhancer peptide,IEP）。IEP为一段长为23个氨基酸的多肽片段,氨基酸序列为:RRRPKGRGKPPPEKQRPTDCHLC。我们将IEP连接到IFNα的3’端合成新型的干扰素SIFα,其并未改变干扰素的基本空间结构。IEP短肽的修饰也没有影响到干扰素的分泌。Western Blot结果证实IFNα-IEP表达载体可以完整表达带有IEP片段的干扰素α（IFNα大小约21.6 k D,带有IEP片段的SIFα大小约为24.4 k D）。（2）与普通干扰素相比,加入IEP后的新合成干扰素SIFα对胰腺癌ASPC及CFPAC1细胞具有更强的生长抑制作用;它能使更多的胰腺癌细胞阻滞于S期。与IFN-α相比较,SIFα可增强胰腺癌细胞对化疗药物吉西他滨的敏感性,两组间具有明显统计学意义（P<0.05）。（3）对于胰腺癌ASPC及CFPAC1细胞,含有等浓度的SIFα、IFNα的上清液均具有明显的抑制细胞增殖的作用。与IFNα相比,SIFα的抑制作用更强,两组对比,P值小于0.05,具有统计学意义。（4）通过RT-PCR、q PCR等技术检测干扰素相关基因的表达情况,结果提示SIFα更能激活JAK-STAT干扰素信号传导通路,诱导MX1、OAS2等干扰素相关基因持续高表达。同时经流式细胞术检测,结果证明SIFα与胰腺癌细胞膜的干扰素受体具有更强亲和力。研究结论:（1）通过应用c DNA片段文库筛选技术,我们发现一段来自胎盘生长因子-2（PLGF-2）C端的多肽片段,它长为23个氨基酸,可以增强干扰素抑制胰腺癌细胞增殖的作用。将IEP连接到IFNα的3’端合成新型的干扰素SIFα,其并未改变干扰素的基本空间结构。（2）与普通干扰素IFNα相比,加入IEP后的新合成干扰素SIFα,具有更强的抑制胰腺癌细胞增殖的作用。与吉西他滨合用时,二者表现出更强的协同作用。（3）SIFα可以激活JAK-STAT等干扰素信号通路,诱导干扰素相关功能基因高表达,诱导肿瘤细胞凋亡;经流式细胞术检测发现SIFα与细胞膜上的干扰素受体具有更高的亲和力。