N1-甲基腺嘌呤（N1-methyladenine,1m A）是DNA中普遍存在的一种重要烷基化修饰。1m A的存在会影响DNA结构,进而影响蛋白质合成效率,甚至改变生物的表型。已有研究表明大肠杆菌中的Alk B蛋白可以对1m A进行去甲基化,并且Alk B的人类同源蛋白ALKBH2和ALKBH3也可以对大肠杆菌中的1m A去甲基化。但在人类细胞中,ALKBH2和ALKBH3对1m A的修复研究较少,具体的修复机制尚不明确。本文中,我们首先利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建ALKBH2和ALKBH3基因突变细胞系,然后利用含有1m A的穿梭质粒结合第二代测序研究了ALKBH2和ALKBH3在1m A复制过程中的生物学效应,主要研究内容如下:（1）ALKBH2和ALKBH3基因突变细胞系的构建及验证。首先,构建含有靶向ALKBH2和ALKBH3基因的sgRNA的pX330A载体。然后,将载体转染到HEK 293T细胞中,挑选出单克隆细胞系扩大培养后通过对PCR扩增产物测序验证是否存在基因突变,测序结果显示ALKBH2和ALKBH3基因均发生突变。最后,对突变的细胞系进行蛋白质免疫印迹实验,验证其是否影响蛋白质的表达。实验结果表明ALKBH2和ALKBH3基因突变细胞系已成功构建。（2）ALKBH3的烷基化修复功能的验证。首先,采用实时荧光定量PCR分析ALKBH3基因突变细胞系m RNA水平的变化,结果表明ALKBH3-/--12细胞系中ALKBH3的相对m RNA水平无显著降低。然后,对ALKBH3的核定位信号进行验证,提取ALKBH3-/--12细胞的核蛋白和质蛋白并进行了蛋白质免疫印迹实验。结果显示ALKBH3-/--12细胞系中ALKBH3的核蛋白含量与野生型相比无明显差异,表明ALKBH3-/--12的N端缺失序列不影响ALKBH3的核定位,ALKBH3的核定位信号还需要进一步研究。最后,通过细胞毒性实验初步验证了ALKBH3的烷基化修复功能。（3）ALKBH2和ALKBH3在1m A复制过程中的生物学效应研究。首先,将含有1m A损伤的质粒转染到ALKBH2或ALKBH3基因突变细胞系中,提取复制产物并去除亲本质粒。然后,对复制产物进行巢式PCR扩增。最后,对扩增产物进行高通量测序。对测序结果进行分析发现ALKBH3对1m A的复制过程无显著影响,而ALKBH2会影响1m A在细胞中的复制效率。综上所述,本文中主要针对ALKBH2和ALKBH3在1m A复制过程中的生物学效应进行了研究,结果显示ALKBH2在1m A的正常复制过程中发挥重要作用并影响复制效率,而ALKBH3对1m A的复制效率和保真性均无显著影响,这种差异可能与ALKBH2和ALKBH3对1m A的修复机制不同有关。