人脐带间充质干细胞外泌体对K562细胞增殖影响的研究

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目的:1、研究正常人脐带间充质干细胞来源外泌体对体外培养K562细胞增殖、凋亡的影响。2、研究正常人脐带间充质干细胞来源外泌体对K562细胞株经典Wnt/β-catenin信号途径活性的影响。方法:1、采用组织贴壁法从正常人脐带中分离间充质干细胞,传代培养纯化;2、收集P3-P6代培养上清,提取外泌体,透射电镜观察形态,流式细胞术检测其表面标志,BCA法测定外泌体的蛋白量;3、外泌体与体外培养的K562细胞作用72h后,采用MTT比色法检测K562细胞增殖变化,采用流式细胞仪技术检测Annexin V-FITC/PI双染的对照组及实验组K562细胞的凋亡率;4、外泌体与体外培养的K562细胞作用72h后,Western blot检测β-catenin蛋白在实验组和对照组K562细胞中的表达情况;使用RT-PCR法检测β-catenin m RNA表达情况。结果:1、成功分离培养人脐带间充质干细胞。2、分离获得脐带间充质干细胞来源的外泌体,电镜观察外泌体呈碟状。3、MTT结果显示,人脐带间充质干细胞来源的外泌体对K562细胞的增殖有抑制作用;流式细胞术结果显示,实验组K562细胞凋亡率为(12.03±1.2)%,与对照组(1.207±0.09)%相比,差异具有统计学意义。4、RT-PCR结果显示,实验组β-catenin m RNA的相对表达量为(18.33±0.6566)%,与对照组(24.33±0.4910)%相比明显降低差异有统计学意义;Western blot结果显示,实验组β-catenin蛋白的相对表达量为(34.23±1.841)%,与对照组(64.00±2.676)%相比明显降低,差异有统计学意义。结论:1、人脐带间充质干细胞外泌体能抑制K562细胞的增殖能力,并促进其凋亡;2、人脐带间充质干细胞外泌体可下调K562细胞Wnt/β-catenin经典途径的活性。
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