氟西汀对星形胶质细胞中ΔFosB表达的影响

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前言转录因子△FosB是Fos家族的一名成员,是FosB基因的剪接变体,与Fos家族其它成员一样,在接受急性刺激后,能够短暂而迅速的在特定区域表达,在接受长期刺激后,△FosB能够在脑内特定区域聚集,这些刺激包括成瘾性药物、抗抑郁药物、抗精神病药物等。由于△FosB具有独特的稳定性,一旦在脑内被诱导产生,将会长时间存在于脑内。本研究发现原代培养的星形胶质细胞表达△FosB,氟西汀能够增加△FosB的表达,且该作用具有浓度依赖性和时间依赖性。原代培养的星形胶质细胞表达5-HT2A受体和5-HT2B受体,但是不表达5-HT2C受体和5-HT转运体。SB204741是5-HT2B受体的拮抗剂,能够抑制氟西汀引起的星形胶质细胞中△FosB表达的上调。DOI是5-HT2A/2C受体的激动剂,长期作用于星形胶质细胞,对△FosB的表达没有影响。目的1、原代培养的星形胶质细胞是否表达△FosB。2、氟西汀对星形胶质细胞中△FosB表达的影响。3、5-HT2B受体是否参与氟西汀引起△FosB表达的变化。方法原代培养的星形胶质细胞取材于新生一天的CD-1小鼠大脑半球,无菌分离大脑半球新皮质,切割,震荡,先后通过100μM和70μM的滤网,放入FalconPrimaria培养皿中,将制备好的细胞放于37℃,二氧化碳/空气(5%:95%)细胞培养箱中。培养液为含有20%马血清的DMEM,每隔3天更换一次培养液,第三次细胞换液,培养液中马血清的浓度改为10%。培养2周后,再加入0.25mMdBcAMP促进细胞分化成熟,一周后用于试验。细胞经氟西汀(5μM-60μM)、DOI(1μM)、SB204741(2μM)处理(30分钟-7天),检测△FosB的表达水平。我们使用逆转录聚合酶链反应检测△fosBmRNA的表达,用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,用Fluorchem 5500观察结果。使用蛋白免疫印迹检测△FosB蛋白表达水平,用扫描仪扫描显出的色带,Window AlphaEase TMFC 32-bit分析软件进行灰度分析。我们使用SPSS13.0软件进行统计学分析,多组资料使用单向方差分析方法进行比较,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果1、原代培养的星形胶质细胞表达△FosB,使用浓度为5μM、10μM、20μM、40μM、60μM的氟西汀刺激细胞,1小时后收集细胞,当氟西汀浓度为10μM时△fosB mRNA的表达水平开始升高,并且具有浓度依赖性,当浓度为40μM、60μM时△fosB mRNA表达的量约为对照组的200%,60μM与40μM相比△fosB mRNA表达不再升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、使用浓度为10μM的氟西汀刺激星形胶质细胞,分别在30分钟、1小时、2小时后收集细胞,氟西汀使星形胶质细胞中△fosB mRNA的表达水平增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、10μM氟西汀作用于星形胶质细胞,分别在1天、3天、7天收集细胞,氟西汀在三个时间点均能增加星形胶质细胞中△FosB蛋白的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。2μM SB204741能够抑制氟西汀引起的星形胶质细胞△FosB蛋白表达上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。4、浓度为1μM的DOI作用于星形胶质细胞3天,对△FosB蛋白的表达水平没有影响。结论在原代培养星形胶质细胞中存在△fosB mRNA和△FosB蛋白的表达。急性和慢性应用抗抑郁药物氟西汀能够增加△fosB mRNA和△FosB蛋白的表达,而且这种作用具有浓度依赖性。1μM DOI对于星形胶质细胞中△FosB的表达没有影响,而2μM SB204741能够抑制氟西汀引起星形胶质细胞中△FosB表达上调,因此认为氟西汀增加星形胶质细胞中△FosB的表达可能与5-HT2B受体有关。
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