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研究目的:动脉血管壁主要由内膜，中膜和外膜三层结构组成。长期以来血管外膜被认为是对血管起着支持和保护的作用，然而，越来越多的证据表明外膜是一个动态复杂的涉及多种类型细胞相互作用的结构，它参与血管的生长和修复，与微环境以及平滑肌细胞，内皮细胞等细胞相互作用。随着外膜在血管重塑中的作用日益受到重视，我们研究发现损伤血管外膜持续性表达血管内皮生长因子1型受体(Flt-1)。同时，认识到外膜也是血管炎症的重要参与者，但是外膜介导血管炎症的具体机制仍不清楚，Flt-1是否在此过程发挥了重要作用？因此，在本研究中，我们进一步探讨在外膜成纤维细胞中血管内皮生长因子(VEGF)是否通过Flt-1调节骨桥蛋白(OPN)的表达参与血管炎症以及新生内膜的形成。 方法和结果:OPN是一种分泌型的糖基化磷蛋白，并且作为一种潜在的促炎症因子参与各种炎症疾病。我们发现OPN促进外膜成纤维细胞(AFs)迁移并且参与血管损伤后新生内膜的形成，同时OPN的表达受多种炎症因子的调节。因此，我们假设VEGF可以诱导成纤维细胞表达并分泌OPN参与炎性细胞的招募以及血管炎症和随后新生内膜形成的过程。首先，在原代培养的外膜成纤维细胞中，利用Western Blot方法检测到VEGF在时间梯度和浓度梯度上诱导细胞内OPN的表达。进一步收集VEGF刺激细胞后的条件培养液，用ELISA方法检测到VEGF也在时间梯度和浓度梯度上诱导细胞分泌OPN到条件培养液中，特异性的anti-Flt-1六肽预处理细胞能抑制OPN的表达及分泌。用Transwell实验技术发现VEGF刺激外膜成纤维细胞迁移是依赖于OPN的。同时VEGF加强外膜成纤维细胞条件培养液诱导巨噬细胞的趋化活性，并且anti-Flt-1六肽预处理外膜成纤维细胞能抑制这种效应。利用OPN中和性抗体特异性地阻断外膜成纤维细胞条件培养液中的OPN也能抑制VEGF诱导巨噬细胞的趋化活性。在颈动脉球囊损伤模型中，经血管外膜途径给予anti-Flt-1六肽局部干预Flt-1信号导致血管新生内膜的减少。在不同时相的损伤模型中，免疫荧光检测到VEGF和OPN首先出现在损伤血管的外膜并且在损伤后期三层细胞均明显表达。同时，巨噬细胞浸润到外膜数目不断增多有从外向内迁移的趋势。新生内膜的抑制与外膜中VEGF和OPN表达减少，血管增殖细胞以及外膜中巨噬细胞侵润数日的减少有关。此外，ERK1/2信号途径的激活与OPN的上调有关。 研究结论:我们的研究报道了在外膜成纤维细胞中的信号机制调节在血管炎症和新生内膜形成中起了重要的作用。具体新意表现在:1)首先证实了在血管外膜存在VEGF/Flt-1/OPN的信号通路诱导巨噬细胞的趋化活性。2)经外膜途径特异性干预Flt-1信号抑制损伤血管新生内膜的形成以及巨噬细胞的浸润。因此，这些结果进一步拓宽对外膜参与血管功能调控的认识，并且提示Flt-1可能作为潜在的治疗各种血管疾病的分子靶标。