论文部分内容阅读
目的: 将pCMV-Cx43cDNA重组质粒转染入大鼠脑胶质瘤C6细胞,上调C6细胞Cx43表达,探讨C6细胞过表达Cx43对其增殖和侵袭性的影响及ERK/p38MAPK信号通路的调节。 方法: 通过脂质体将 pCMV-Cx43cDNA重组质粒转染入C6细胞,使C6细胞过表达Cx43,并用G418抗性筛选出稳定过表达Cx43的C6细胞,用Western blot检测Cx43蛋白表达;实验分为C6组、C6-non组(转染空载体)、C6-Cx43组(转染Cx43),测定各组细胞倍增时间和软琼脂集落形成实验比较各组细胞集落数。 分别用ERK1/2特异性阻断剂PD98059、p38MAPK特异性阻断剂SB20219处理细胞,MTT比色法检测各组细胞活性;建立体外 Transwell侵袭模型联合MTT法,观察过表达Cx43对C6细胞侵袭能力的影响;Western blot检测各组细胞Cx43、p-Cx43、p-ERK1/2、p-p38和P16蛋白表达。 结果: 成功将pCMV-Cx43cDNA重组质粒转入C6细胞,并用G418筛选得到稳定转染Cx43基因的细胞株。C6-Cx43细胞Cx43蛋白表达量明显增加(P<0.01);C6-Cx43组比C6组、C6-non组细胞增殖速度明显减慢,细胞集落数明显减少(P<0.01)。 MTT比色法、Transwell侵袭模型联合MTT法显示C6-Cx43组比C6组、C6-non组细胞存活率明显降低,侵袭能力明显增强( P<0.01);C6-Cx43+PD98059组、C6-Cx43+SB202190组较C6-Cx43组细胞存明显活率降低,侵袭能力明显增强(P<0.05)。 Western blot显示:C6-Cx43组比C6组、C6-non组Cx43蛋白表达显著增多, p-Cx43、p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达明显减少( P<0.01);C6-Cx43+PD98059组、C6-Cx43+SB202190组比 C6-Cx43组 p-Cx43、p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白表达显著下降(P<0.05)。 C6-Cx43组比 C6组、C6-non组 P16蛋白表达明显增加(P<0.01),提示Cx43蛋白高表达,促进P16蛋白表达水平明显增加,两者呈正相关。 结论: 1. C6细胞成功转染重组质粒pCMV-Cx43cDNA,C6-Cx43细胞Cx43蛋白表达明显增加,显著抑制C6细胞的增殖,增强C6细胞侵袭性,降低p-Cx43、p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白的表达,并使P16蛋白的表达上调。 2. Cx43蛋白可能通过ERK/p38MAPK途径抑制C6细胞的增殖,增强C6细胞侵袭性。