【摘 要】
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为深入耐药机制的研究和逆转耐药,利用反向SELEX技术,设计了含有46个随机寡核苷酸的aptamer库,14个循环筛选出与耐药细胞HL60/ADR高度特异结合的aptamer,并构建到载体pRSET-C
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为深入耐药机制的研究和逆转耐药,利用反向SELEX技术,设计了含有46个随机寡核苷酸的aptamer库,14个循环筛选出与耐药细胞HL60/ADR高度特异结合的aptamer,并构建到载体pRSET-C中,测序确定了12种aptamer序列.并与各种对照比较,对aptamer的特异性进行了鉴定.aptamer与敏感细胞HL60、K562和正常的淋巴细胞无特异性亲和.aptamer的结构特异性也通过与构建的非结合aptamerNRA1和NRA2及原核基因Ag85B(221mer)比较得到确证.在筛选过程中总结了一些经验,如aptamer库的设计中固定序列尽可能富含GC,随机序列必需适度,不可太长,否则由于分子种类少而降低了库容量,随机序列应根据筛选的靶分子的纯度以及所采取的筛选方式而定.进而对所筛aptamer的功能进行了研究.与耐药细胞HL60/ADR特异结合的aptamer可以监测细胞耐药相关靶分子的表达动力学,并可对于不同药物或不同细胞的交叉耐药进行检测,结果说明aptamer可以同抗体一样用于检测细胞耐药性.对于aptamer分子对所结合的靶分子的功能影响进行了检测,结果显示,aptamerRA7和RA12可以影响所结合的靶分子的耐药功能,使细胞的药物敏感性增强,而且联合应用有一定的叠加作用.耐药特异性aptamer由于具有高度特异性,是其它分子和药物无法相比的,而且成本低,容易控制.与耐药细胞特异结合的aptamer可用于深入耐药机制的研究,而且有可能成为临床新的耐药检测工具和和新的耐药逆转剂.
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