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人参Panax ginseng C.A.Meyer.系五加科(Araliaceae)植物,是中国一种传统的名贵中药材,在《神农本草经》中列为上品,具有大补元气、固脱生津、安神益智等功效.该研究进行了以下方面的工作:1.利用发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes的Ri质粒,以人参种子胚萌发形成的实生苗不同部位为外植体,成功诱导出人参毛状根,在转化中添加植物激至少(NAA、KT)和某些信号物质(乙酰丁香酮等),提高了转化率.2.研究表明人参毛状根具有多分叉、生长失去向地性、在无激素培养其中可生长等形态和生理特别,根的组织均处于初生构造状态;利用T<,L>-DNA中草药rolC序列中的特异性引物,应用PCR技术对毛状根进行了分子水平的鉴定,并利用理化手段对毛状根转化后产生的冠瘿碱进行了薄层定性鉴定,从不同水平上证实了人参毛状根核基因组中已整合了外源Ri质粒的T-DNA片段.3.由于Ri质粒转化后形成的毛状根在形态、生物产量以及次生代谢产物含量等方面表现出多态性,该研究以D值(生长倍数×皂甙含量×折干率)为指标进行株系及培养基的筛选,筛选出E4株系为最佳人参毛状根培养株系;培养时氮源对毛状根影响较大,当培养基中NH<,4><+>氮浓度过高或氮源浓度太低都会影响人参毛状根的生长,以培养基中NH<,4><+>/NO<,3>比例小于0.1的B<,5>液体培养基为毛状根的最适培养基.4.对人参毛状根培养过程中的生物产量、可溶性蛋白含量、同工酶酶谱、清除活性氧的活性、ATP及皂甙的积累等多种指标性成分的动态变化进行了系统研究.5.在人参毛状根的固体培养过程中光照后出现了毛状根脱分化形成愈伤组织的现象.通过对这种愈伤组织DNA中rolC片段的PCR鉴定表明,外源基因T<,L>-DNA的丢失可能是毛状根脱分化的原因之一,同时也说明外源基因转入植物基因组中后的不稳定性.6.研究发现细胞分裂素KT和黑曲霉多糖诱导子对人参毛状根生物产量和皂甙积累都有促进作用.7.该研究首次应用DMSO做为有机相对人参毛状根进行液体悬浮助溶培养,发现培养液中DMSO在0.1﹪时可促进人参毛状根向培养液中释放皂甙,并解除皂甙的反馈抑制,使培养液中皂甙含量比对照组高2.5倍,同时对毛状根的生长无抑制作用.