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背景:冠心病是造成老年人死亡的常见原因。冠心病的病因尚未完全明确,近年来多数学者认为血管内皮的损害是动脉粥样硬化的始动因素,其中高血脂损伤内皮细胞导致脂肪沉积出现不同程度的内皮细胞泡沫化,被认为是动脉粥样硬化的最重要的危险因素。近年来有证据表明慢性低度炎症反应参与了冠心病的发生发展,从而引发了免疫炎症在冠心病发病机制的探索。IL-22属于IL-10家族成员,主要由T细胞和固有淋巴细胞分泌产生;IL-22在心血管领域研究较少。本课题组前期研究显示,IL-22在冠心病和糖尿病患者血清中均升高;在细胞实验发现,IL-22通过IL-22R1对高脂/高糖损伤的内皮细胞发挥保护作用,但是具体的作用机制尚不明确。磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)通路广泛存在于细胞中,Akt通过磷酸化m TOR、糖原合成酶激酶-3(GSK-3)等下游分子,对细胞增殖、分化、凋亡等过程起重要的调节作用。有研究表明PI3K/Akt通路的激活通过抗凋亡等作用,在心肌缺血再灌注损伤方面发挥保护作用;另有研究显示激活PI3K/Akt/GSK3β通路可以减少心肌细胞凋亡,减轻大鼠心梗面积,增加梗死区新生血管形成,改善心功能;激活该通路也可以减轻炎症反应,减少神经元凋亡,改善动物认知记忆功能。目前未见文献报道IL-22在LPC对血管内皮损伤过程对PI3K/Akt/m TOR通路的调节作用。目的:初步探讨IL-22在LPC对血管内皮损伤过程中可能的保护机制,探讨PI3K/Akt/m TOR信号通路在IL-22保护过程中所起的作用。方法:用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),建立高脂损伤模型,加入不同浓度的IL-22,检测细胞活力的变化;建立高脂损伤模型,加入不同浓度的IL-22后,裂解细胞提取细胞总RNA或提取细胞总蛋白,随后通过定量PCR以及Western Blot方法以观察目的基因和目的蛋白的相对表达;建立高脂损伤模型,加入不同浓度的IL-22后,留取细胞上清,用流式细胞蛋白分析技术(Cytometric Bead Array,CBA)测定炎症因子浓度。结果:(1)用溶血卵磷脂(LPC)干预HUVECs建立高脂损伤模型,加入不同浓度的IL-22后,观察到内皮细胞活力增加,IL-22对高脂诱导的内皮细胞损伤有保护作用。(2)LPC作用下,在基因水平,内皮细胞的PI3K、Akt、m TOR、Bcl-2表达水平较对照组相比降低,而PTEN、Bad、Bax表达水平较对照组相比上升。加IL-22作用后,内皮细胞的PI3K、Akt、m TOR、Bcl-2表达水平较LPC组升高,其中Akt、m TOR、Bcl-2较LPC组相比出现显著上升;而PTEN、Bad、Bax表达水平较LPC组降低,PTEN、Bad较LPC组相比出现显著降低。(3)LPC作用下,在蛋白水平,内皮细胞的PI3K、p-Akt、p-m TOR、Bcl-2表达水平较对照组相比降低,而PTEN、Bad、Bax表达水平较对照组相比升高。加IL-22作用后,内皮细胞的PI3K、Akt、p-AKT、p-m TOR、p-GSK3β、Bcl-2表达水平较LPC组相比升高,有统计学差异;而PTEN、Bad、Bax表达水平较LPC组相比降低,有统计学差异。(4)LPC作用下,细胞上清的IL-6、IL-8的浓度较对照组升高,有统计学意义,IL-22各组和LPC组无明显差异;细胞上清的IL-10、IL-1β、TNF、IL-12p70的浓度在各组之间均无明显差异。结论:IL-22可以减轻高脂诱导的内皮细胞损伤,IL-22可能通过PI3K/Akt信号通路及其下游相关因子发挥保护作用。合理调控IL-22以及PI3K/Akt/m TOR通路对冠心病可能有一定的临床治疗前景。