家蚕细胞系(BmN)凋亡过程中相关基因的转录特征研究

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家蚕是重要的经济昆虫,也是典型的模式昆虫。以家蚕为对象研究细胞凋亡已经有相关的报道,如家蚕的血液能起抗凋亡作用,蜕皮激素能诱发细胞凋亡等。但与线虫、果蝇、人等模式生物相比,家蚕中的细胞凋亡代谢途径的研究仍处于起步阶段,以家蚕卵巢细胞系(BmN)为材料研究凋亡的报道很少。本研究在体外诱导因素(H2O2和病毒)作用下,通过形态学观察,采用琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR, QRT-PCR)等技术手段对BmN细胞凋亡过程中的细胞形态、相关基因的表达水平差异进行了研究,并初步探讨了凋亡过程中家蚕两种乙酰胆碱酯酶基因(ace1和ace2)在凋亡过程中的作用,结果如下。H2O2诱导家蚕BmN细胞凋亡。BmN细胞在0.100mol/L H2O2诱导下,3h即可在光学和荧光显微镜下观察到凋亡特征,诱导24h后,通过琼脂糖凝胶电泳可观察到DNA呈明显的梯状条带。QRT-PCR结果表明,家蚕端粒酶基因(Bombyxmori, telomerase gene, Bmtrt)在凋亡过程中表达量逐渐降低,家蚕凋亡相关基因Bmcaspase-5基因表达量逐渐升高,24h表达量为对照的41.942倍;家蚕P53基因(Bmp53)基因表达量先降低后逐渐升高,24h表达量为对照的1.592倍。结果表明经H2O2诱导后,家蚕凋亡相关基因都出现了特征性表达,各基因和凋亡发生的关系还待进一步研究。家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus, BmNPV)感染家蚕BmN细胞凋亡。BmNPV液30μL(1×108PFU/mL)感染家蚕BmN细胞24h,细胞变圆,边缘光滑,48h后表现了明显的细胞凋亡特征。QRT‐PCR结果显示,凋亡相关基因转录水平有明显变化。Bmcaspase‐1、Bmice‐5基因48h表达量上调,分别为对照组表达量的15.195倍、6.245倍;Bmcaspase‐5、Bmp53基因72h表达量明显上调,分别为对照组表达量的22.911倍、4.610倍;Bmtrt基因表达量下调。结果表明,经BmNPV感染后的BmN细胞发生凋亡,为研究BmNPV感染机制提供新的参考信息。家蚕乙酰胆碱酯酶基因在BmN细胞凋亡过程中的表达特征。研究了经H2O2和BmNPV诱导后家蚕乙酰胆碱酯酶基因的表达特征,结果显示,H2O2诱导的细胞凋亡过程中ace1基因表达量逐渐升高,而ace2表达量降低;BmNPV感染的细胞凋亡过程中,ace1和ace2表达量均有不同程度的上调,ace1上调表达更加明显。本研究正常细胞与凋亡细胞中,ace2基因表达量都高于ace1基因表达量, ace2/ace1最大达到67.449。结果表明,ace1在家蚕BmN细胞凋亡过程中发挥重要的作用,而ace2在不同诱导物诱导的凋亡过程中可能具有不同的功能,其作用机制有待于进一步深入研究。本研究结果为探索不同诱导条件下家蚕细胞水平上的凋亡机制提供了参考。
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