论文部分内容阅读
目的： 研究MODS条件下MMP-9和TIMP-1表达水平的改变与血管内皮损伤之间的关系，探索通过抑制MMP-9治疗MODS的新方法。 方法： (1)采用盲肠结扎穿孔法(CLP)构建MODS大鼠模型，检测各组大鼠肺、肝、肾、小肠功能变化，HE染色观察各受累组织形态学改变，ELISA检测各组血清中TNF-ɑ、IL-1β、MMP-9及TIMP-1含量的变化，RT-PCR和免疫组化检测各组织MMP-9及TIMP-1表达的变化，免疫荧光法及Western blot检测各组织IV-C表达的变化。 (2)复制脓毒症内皮细胞损伤模型并采用siRNA干扰技术抑制TIMP-1基因的表达，MTT实验检测内皮细胞存活率，ELISA和Transwell实验分析内皮细胞分泌MMP-9和TIMP-1的能力，Western blot检测内皮细胞MMP-9、TIMP-1、IV-C及TM表达的变化。 结果： (1)成功复制MODS大鼠模型：对照组各组织结构正常，模型组表现为不同程度的肺、肝、肾、小肠组织损伤。 (2)ELISA检测血清中TNF-ɑ、IL-1β、MMP-9及TIMP-1含量的变化：与对照组比较，模型组血清中TNF-ɑ、IL-1β、MMP-9及TIMP-1的含量均明显升高。 (3)RT-PCR和免疫组化检测各组织MMP-9及TIMP-1表达的变化：与对照组比较，模型组肺、肝、肾、小肠组织中MMP-9及TIMP-1的表达均明显升高。 (4)免疫荧光法及Western blot检测各组织中IV-C表达的变化：与对照组比较，模型组肺、肝、肾、小肠组织中IV-C的表达均明显降低。 (5)MTT实验结果表明：与对照组比较，脓毒症组内皮细胞相对存活率明显降低；与脓毒症组比较，TIMP-1 siRNA组内皮细胞相对存活率明显降低。 (6)ELISA检测内皮细胞分泌MMP-9和TIMP-1含量的变化：脓毒症血清干预后，内皮细胞释放MMP-9及TIMP-1的含量明显升高。 (7)Western blot检测内皮细胞MMP-9、TIMP-1、IV-C及TM的表达结果显示，与对照组比较，脓毒症组内皮细胞TM及IV-C的表达量减少，MMP-9及TIMP-1的表达量增加；与脓毒症组比较，TIMP-1 siRNA组内皮细胞TM及IV-C的表达量减少，MMP-9的表达量增高。 (8)Transwell实验结果表明：与对照组比较，脓毒症组穿过基质胶的细胞数量明显增多；与脓毒症组比较，TIMP-1 siRNA组穿过基质胶的细胞数量明显增多。 结论： (1)MMP-9和TIMP-1通过共同调节细胞外基质主要成分IV-C的分解及合成代谢在维持基质的稳定中发挥重要作用。 (2)MODS过程中MMP-9/TIMP-1的比例发生失衡，而这种失衡与基质的损伤密不可分。 (3)TIMP-1作为MMP-9的抑制剂在脓毒症血清诱导的内皮损伤中发挥保护作用。