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本试验以火加松3年生优树嫁接后3年的嫩芽为外植体,在离体条件下诱导出芽,并进行分化、伸长和生根培养,诱导出了无菌体系。试验材料来自广东省英德市英德种子园火加松子代林2号家系,3年生时选优,2008年春季嫁接至林学院温室。由于接穗为优树顶端成熟枝条,用大树嫁接株作为外植体进行组织培养,长出从生芽,再进一步诱导出根,在生产上有较大的实际意义。 1.外植体的污染率 研究了以0.1%升汞灭菌1 min加30 s的外植体污染率。试验结果为,3 d后开始长真菌,7 d后开始长细菌,且在培养了30 d之后,还有长菌的迹象;外植体的污染率为63%。 2.不同6-BA浓度对外植体发芽率的影响 本试验采用的培养基为DCR培养基,附加蔗糖3%,琼脂粉0.6%,pH值为5.8,6-BA水平为0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mg·L-1。初步结果为不同浓度培养基中,外植体都可发芽,6-BA浓度为0.5 mg·L-1和1.0 mg·L-1时,发芽率较高。 3.不同6-BA浓度对芽的诱导和分化的影响 培养基为DCR培养基,附加蔗糖3%,琼脂粉0.6%,pH值为5.8,6-BA水平为0,1,2,3,4 mg·L-1。 试验结果:6-BA浓度和芽的平均生长量存在极显著的负线性相关关系;6-BA浓度和芽的增殖率存在明显的正相关性,但不存在显著的线性相关关系。 五种处理的DCR培养基都可以使芽生长和增殖,6-BA浓度为0时,有最大的平均生长量,为0.81 cm,比较适用于芽的伸长生长;添加的6-BA浓度为3.0 mg·L-1时,芽增殖率最高,为215.8%,比较适用于芽的增殖。 4.NAA对芽的影响 本试验采用DCR培养基,分别添加NAA0,0.1 mg·L-1。 两种水平的NAA,都能使芽伸长和增殖。NAA水平为0时,其生长量远大于NAA水平为0.1 mg·L-1时的生长量,且增殖率也大于0.1 mg·L-1时的增殖率。因此NAA水平为O时,比较适合火加松芽的伸长。同时根据试验观察,不论哪种NAA水平,无菌苗生长都比较弱,且下端有枯萎的黄叶出现。 5.活性炭对芽的影响 试验采用DCR培养基,分别添加活性炭0,1,2 g·L-1。 加入活性炭后,无菌苗长势明显好转,苗木较之无活性炭的培养基健壮。三种水平的活性炭都可以使芽得到伸长和增殖,当活性炭的量为0时,其增殖率最大,可达到133.3%;当活性炭量为1 g·L-1时,平均生长量为1.19 cm,高于其它两个水平,随着活性炭量的增加,平均生长量也逐渐增大,到达1 g·L-1时,开始下降,因此加入1 g·L-1的量最为适宜。 6.芽的生根诱导 将高度大于2 cm的植株接种于添加有IBA的DCR培养基中,其中IBA浓度水平为1,2,3,4,5 mg·L-1,附加蔗糖3%,琼脂粉0.6%,pH值为5.8。观察发现,30 d后没有成功诱导出根。但是植株有一定的伸长生长,当IBA浓度较低时,也有少量的丛生芽产生。 由于以上的试验条件没有诱导火加松嫩梢生根,因此将培养基做了调整,调整如下: 将高度大于2 cm的植株接种于添加有IBA的1/2DCR培养基中,其中IBA浓度水平为1,3,4,5,6 mg·L-1,并附加蔗糖2%,琼脂粉0.6%,pH值为5.8。 30 d后没有成功诱导出根,当IBA浓度较高时,有少量的丛生芽产生。