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内毒素血症是临床常见的危重症状之一,伴发在各种疾病的病理过程中。内毒素诱发的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)在细胞水平上表现为单核巨噬细胞、中性粒细胞等炎性细胞的聚集和浸润引起的的炎性反应,它在分子水平上表现为多种炎性因子和炎症介质的过度释放。研究结果表明活性氧和活性氮介导肺的氧化损伤,具有重要生物学作用的的活性氧包括超氧阴离子自由基、过氧化氢、羟自由基等和活性氮包括一氧化氮分子、过氧亚硝基,他们都可通过不同的途径导致细胞损伤,如直接损伤DNA导致键断裂和点突变、脂质过氧化作用、蛋白质氧化,转录因子的改变等。为了中和代谢过程产生过量的自由基,细胞表达大量内源性抗氧化剂如超氧化物歧化酶、过氧化物酶、谷胱甘肽过氧化物酶等,但这些抗氧化剂在急性炎症过程中被快速消耗。
线粒体是细胞的功能中心,功能包括产生能量和维持细胞钙稳态,也是自由基产生的主要场所,自由基介导的线粒体功能障碍在内毒素诱发的多器官衰竭的病理过程中起重要作用。体内外实验结果表明褪黑素具有抗氧化能力,不仅可以捕捉活性氧和活性氮自由基,而且可以增强某些抗氧化酶的表达和活性。最近研究认为氨基胍是诱导型一氧化氮合酶相对选择的抑制剂。因此根据以前的实验结果设计以下实验,探讨山羊内毒素血症时应用褪黑素和氨基胍观察其对肺线粒体自由基代谢的影响。
本实验将72只山羊随机分成生理盐水对照组、内毒素(LPS)组、褪黑素保护(LPS+MT)组、褪黑素(MT)组、氨基胍保护(LPS+AG)组、氨基胍(AG)组,共6组,每组12只,其中每组分别在注射LPS或生理盐水后3h与6h进行相关指标测定。各组山羊在麻醉后立即剖取肺脏,并按规定流程快速提取线粒体。测量山羊肺组织匀浆和肺线粒体谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)以及GR的活性,还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,丙二醛(MDA)的含量以及巯基的含量。
结果表明:
1.山羊内毒素血症时,肺组织和肺线粒体的GR、GSH-Px和SOD活性及SH含量等均显著下降(P<0.05),MDA浓度明显升高(P<0.05)。
2.应用MT和AG进行保护后,由LPS引起的肺及线粒体功能障碍得到了缓解。与内毒素组比,GR、GSH-Px和SOD等活性增强,MDA的生成减少(P<0.05)。
结论:应用褪黑素和氨基胍可以有效保护线粒体的氧化损伤,本研究结果为制定内毒素血症有效的防治措施提供了有力证据。