八种常见食源性致病菌的PCR检测方法的研究

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本文主要研究了食品中常见致病菌的PCR.快速检测方法。本文所研究的八种致病菌分别为:蜡样芽孢杆菌(Bacillus Cereus),金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus),化脓链球菌(Streptococcus pyogenes),大肠杆菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7):阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii),沙门氏菌(Salmonella),志贺氏菌(Shigella),单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytohenes)。通过在NCBI的基因库(GenBank)中进行BLAST比对,找到了具有种特异性的DNA序列作为目的序列,并运用专业引物设计软件Primer Premier 5.0和Oligo6.0设计出相应的引物,通过对各菌基因组的PCR程序后选出特异性最强的引物对作为检测各菌的引物对。在建立了各菌常规PCR检测方法的基础上,探索多重PCR检测方法。通过不断的调整和优化,最终找到了八对具有很高相容性的引物,通过优化的PCR程序实现了八重PCR同时检测不同致病菌的目标。经过实验验证:本研究中的所有致病菌在经过16小时的前增菌后,都可以通过本文的方法检测出来,其灵敏度可达<10CFU/g样品。
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