目的：　　探索糖尿病肾病（DN）大鼠早、中、晚期的时间；观察通络益肾方对早、中、晚期DN大鼠的血糖，尿微量白蛋白，24h尿蛋白定量（24h U-Pr），血脂，肾功能等的影响，证实通络益肾方的疗效；继而观察该方对肾小球足细胞超微结构及足细胞相关蛋白（α-actinin-4、synaptopodin、F-actin、Nephrin、CD2AP）的表达，线粒体mtDNA拷贝数，线粒体膜电位等的影响，探讨通络益肾方保护DN肾小球的可能机制，为临床应用该方治疗DN提供实验依据。　　方法：　　实验一：DN大鼠早、中、晚期时间界定。SD雄性大鼠120只，适应性喂养7天，检测血糖和尿蛋白，结果均为阴性者用于实验。大鼠随机分为空白对照组（n=50）、DN模型组（n=70）。采用右肾切除+腹腔注射链脲佐菌素+高脂饮食建立DN大鼠模型，空白对照组大鼠予假手术，并给予普通饲料喂养。观察26周，定期检测大鼠体重、饮水量、尿量、尿微量白蛋白、24h U-Pr、空腹血糖、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、肾脏病理（光镜及电镜）等指标，界定DN模型的早、中、晚期。　　实验二：通络益肾方对早、中、晚期DN大鼠的疗效观察及作用机制探讨。260只SD雄性大鼠随机分为空白对照组（A组）50只，DN组模型210只。A组大鼠给予普通饲料喂养及假手术，DN造模组予右肾切除+腹腔注射链脲佐菌素+高脂饮食造模。造模成功的大鼠随机分为5组：即DN模型组（B组）61只、缬沙坦治疗组（C组）47只、通络益肾方早期治疗组（D组）47只、通络益肾方中期治疗组（E组）23只、通络益肾方晚期治疗组（F组）23只。其中，A组、B组、C组、D期分别在9周末、22周末各随机抽取数只大鼠称重、收集24h尿液，尾静脉取血测血糖后处死取材。余大鼠在第26周末再次称重、收集24h尿液，尾静脉取血测血糖后处死取材。观察大鼠一般状态，检测体重、饮水量、尿量、24h U-Pr、血糖、甘油三酯、总胆固醇、Scr、BUN；HE、PAS、Masson染色光镜观察大鼠肾组织病理改变；电镜观测足细胞形态及线粒体超微结构；免疫组化检测足细胞骨架蛋白α-actinin-4、synaptopodin、F-actin的变化；RT-PCR检测Nephrin、CD2AP mRNA表达、mtDNA拷贝数；流式细胞术结合JC-1染色检测细胞线粒体膜电位。　　结果：　　（一）实验一：共持续26周。　　第0周：DN模型组予STZ腹腔注射后连续3天同一时间点尾静脉采血测血糖＞16.7mmol/L，确定为糖尿病大鼠（DM）。在STZ腹腔注射3天后测尿微量白蛋白升高，24h U-Pr＞30mg，提示DN大鼠模型制备成功，为DN早期阶段。以此时作为实验的起始，记为0周。　　第9周末：DN模型组大鼠血糖＞21.0mmol/L，24h U-Pr持续增高，在9周末显著升高（123.40±22.15mg/24h），与空白对照组（9.05±1.92mg/24h）比较有显著性差异（P＜0.01）；大鼠肾组织HE、PAS染色光镜下观察发现，模型组肾小球内阳性物质及系膜基质明显增多，肾小球基底膜局灶增厚；电镜下观察，模型组9周末时肾小球基底膜增厚达0.28μm，足细胞结构不清，足细胞数目明显减少、密度降低，细胞体积增大。此时进入DN中期阶段。　　第22周末时，DN模型组大鼠血糖＞23.1mmol/L，BUN13.52±1.26mmol/L，Scr73.42±3.51μmol/L；较空白对照组（BUN6.31±1.44mmol/L，Scr39.25±2.92μmol/L）显著升高，有显著性差异（P＜0.01）。肾组织HE、PAS染色光镜下观察可见，模型组大鼠肾小球内阳性物质及系膜基质进一步增多，肾小球基底膜增厚，肾小球内毛细血管呈节段性硬化。电镜下观察，模型组22周末时肾小球基底膜增厚达0.35μm，系膜区增宽并见小泡样和线样结构的物质分布，足细胞数目明显减少、密度降低，细胞体积增大，足突排列紊乱或大片融合，甚至消失。此时进入DN晚期阶段。　　（二）实验二：　　1、通络益肾方对DN大鼠一般状态的影响　　与B组比较，D组大鼠精神状态相对较好，三多一少（多饮、多食、多尿、消瘦）等情况都有不同程度的改善。与D组相比较，E、F组大鼠的精神状态萎靡，大鼠出现白内障，相互撕咬，三多一少等情况都较D组更重。　　2、通络益肾方对DN大鼠血糖、脂代谢的影响　　与同时间点B组比较，C、D组9周、22周、26周末大鼠的血糖均低于B组（P＜0.01或P＜0.05）；与同时间点D组比较，F组9周、22周、26周末时血糖均升高，有统计学意义（P＜0.05）。　　与同时间点B组比较，D组9周、22周、26周末大鼠TG、TC均低于B组（P＜0.01或P＜0.05）；26周末与D组比较，E组、F组大鼠TG、TC显著高于D组（P＜0.01或P＜0.05）。　　3、通络益肾方对DN大鼠24h U-Pr、肾功能的影响　　与同时间点B组比较，D组9周、22周、26周末大鼠的24h U-Pr均明显降低（P＜0.01或P＜0.05）；与同时间点D组比较，E、F组9周、22周、26周末时大鼠24h U-Pr均明显升高（P＜0.01或P＜0.05）。　　与同时间点B组比较，D组9周、22周、26周末大鼠BUN、Scr均低于同时间点B组（P＜0.01或P＜0.05）；26周末与D组比较，E组、F组大鼠BUN、Scr高于D组（P＜0.01或P＜0.05）。　　4、通络益肾方对DN大鼠肾组织病理及足细胞超微结构的影响　　光镜下可见，C组及D组大鼠肾小球球体增大，毛细血管及肾间质充血，肾小管上皮细胞水肿，管腔内有絮状物沉积，但较B组明显减轻。E组和F组大鼠肾组织损害较B组都有不同程度的改善，但差于D组。　　透射电镜下可见，与B组比较，C组及D组、E组、F组足细胞病变减轻，足细胞较为完整，足突排列相对整齐，足突融合现象减轻；细胞骨架纤维排列相对整齐。C组、D组改善更明显。　　5、通络益肾方对DN大鼠足细胞相关蛋白表达的影响　　免疫组化结果显示：与B组相比，各给药组足细胞阳性表达均显著增加，呈点状、不连续分布，D组阳性表达优于E组、F组。　　RT-PCR结果显示：与B组比较，各给药组大鼠肾组织裂孔隔膜蛋白Nephrin、CD2AP mRNA表达均上调，通络益肾方的作用与缬沙坦相当，且某些时间点作用效果较优。　　6、通络益肾方对mtDNA拷贝数的影响　　与同时间点B组比较，D组9周、22周、26周时表达均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）；26周时，与D组对比，E、F组表达显著降低（P＜0.01）。　　7、通络益肾方对线粒体膜电位的影响　　与同时间点B组比较，D组9周、22周、26周时线粒体膜电位表达均明显升高（P＜0.01）；26周时与D组比较，E组和F组线粒体膜电位表达均显著降低（P＜0.01）。　　结论：　　1、右肾切除+高脂饲料+STZ腹腔注射3天后大鼠DN造模成功，此时为DN早期。DN成模9周后为DN中期，22周末为DN晚期。　　2、通络益肾方能改善DN大鼠的一般状态以及三多一少症状；改善糖脂代谢；改善肾功能；改善DN大鼠肾组织病理损伤及足细胞超微结构。　　3、通络益肾方可上调肾组织α-actinin-4、synaptopodin、Factin和Nephrin、CD2A P的表达，减轻足细胞损伤。　　4、通络益肾方可通过上调mtDNA的表达、抑制足细胞线粒体膜电位的下降，减轻线粒体氧化应激损伤，保护肾小球。　　5、通络益肾方早期给药效果优于通络益肾方中期、晚期给药，给药时间越早，效果愈明显。