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目的:通过对黑龙江省胃癌危险因素的调查分析,探讨原发性胃癌的危险因素,为胃癌的一级预防提供科学依据;研究幽门螺杆菌鞭毛蛋白(FlaA)和中性粒细胞激活蛋白(NapA)做为胃癌生物标志物的价值与方式,为胃癌的早期诊断,筛选易感个体提供简便、准确的检测方法。 方法:采用1:1配对的病例对照研究方法,病例为2010年3-7月间黑龙江省肿瘤医院的新发胃癌病例,对照为与病例性别相同,年龄上下不超过2岁的非胃癌患者以及健康体检人群。使用统一设计的调查表,由经过统一培训的调查员与研究对象签署知情同意书后对其进行面对面调查,并同时采集研究对象静脉血5mL,所采集血样均用ELISA试剂盒测定其幽门螺杆菌感染情况。对调查因素进行Logistic单因素和多因素分析,计算各研究因素与原发性胃癌的关联强度OR值及其95%可信区间。 根据GenBank提供的H.pylori标准菌株26695的基因序列设计引物,用PCR技术以H.pylori临床分离株为模板扩增出NapA目的片段,与PMD-18T载体相连构建重组载体,并测序,将测序正确的NapA-PMD-18T重组载体与PGEX-4T-1载体双酶切后连接,测序正确后转化到感受态细胞BL21中,IPTG诱导其表达,采用GST亲和树脂纯化NapA蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定表达蛋白。采用间接ELISA法,分别以FlaA和NapA融合蛋白作为抗原,与H.pylori感染阳性的胃癌患者和非胃癌对照的血清进行反应,测定FlaA和NapA在H.pylori感染阳性者血清中的抗体滴度。 结果:单因素与多因素分析结果均显示,三餐不按时(OR=2.90,95% CI:1.45~5.81),喜食热烫食物(OR=3.23,95%CI:1.42~7.37),喜食油炸食品(OR=1.96,95%CI:1.04~3.70),心理应激能力差(1633,OR=24.24,95%CI:7.36-79.86),吸烟(OR=3.21,95%CI:1.45~7.10),慢性胃炎疾病史(OR=8.18,95%CI:2.76~24.21),胃癌家族史(OR=77.08,95%CI:2.56~2318.05)为胃癌的危险因素;喜食海产品(有时吃OR=0.32,95%CI:0.15~0.68),生吃大蒜(OR=0.52,95%CI:0.28~0.96),淡季多吃水果(OR=0.57,95%CI:0.34~0.96)为胃癌的保护因素。 鞭毛蛋白FlaA与H.pylori感染阳性的胃癌患者的血清反应OD值范围为0.03-0.24,(-x)±S为0.09±0.05,与H.pylori感染阳性的非胃癌对照的血清反应OD值范围为0.01-0.21,(-x)±S为0.06±0.04,取OD值0.1(对照OD值x+S)作为胃癌诊断界值,得到灵敏度为42.96%,特异度为84.78%;其ROC曲线下面积为0.71,最佳临界值为0.07,此诊断点对应的灵敏度为62.12%,特异度为73.12%。成功构建出NapA原核表达系统,并纯化出融合NapA蛋白。NapA与H.pylori感染阳性的胃癌患者血清反应OD值范围为0.03-0.39,(-x)±S为0.11±0.05,与H.pylori感染阳性的非胃癌对照的血清反应的OD值范围为0.05-0.32,x±S为0.13±0.05,取OD值0.18(对照OD值(-x)+S)作为胃癌诊断界值,得到灵敏度为4.44%,特异度为85.71%;其ROC曲线下面积为0.32。 结论:养成良好规律的饮食习惯,不吃太烫的食物,多吃海产品,多吃水果,多吃大蒜,少吃油炸食品,根除H.pylori的感染,及早发现与治疗慢性胃炎,胃溃疡等疾病,保持良好的心态与乐观的生活态度等对胃癌的预防具有积极的作用,可减少胃癌的发生。 FlaA单独作为胃癌相关幽门螺杆菌生物标志物的有一定的诊断价值,与其他检测方法联合应用或许可以进一步提高对胃癌筛检与诊断的灵敏度或特异度,这种联合应用的方式和方法有待于进一步研究;NapA则无任何诊断价值。