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目的：
探讨非对称二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine,ADMA)作用于新生大鼠心肌细胞是否能够诱导心肌细胞肥大。同时观察在ADMA诱导心肌细胞肥大的过程中一氧化氮(oxide nitric,NO)功能的变化以及是否有氧活性物质(Reactive oxygen species,ROS)的生成。
方法：
用原代培养的新生大鼠心肌细胞进行实验。细胞一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的性分别用各自的试剂盒来测定。细胞内荧光信号用荧光倒置显微镜检测。细胞内氧活性物质(Reactive oxygenspecies,ROS)水平用ROS敏感的荧光探针2,7-dichlorofluorescin dictate(DCF-DA)来反应,细胞RNA含量用RNA敏感的荧光探针碘化丙啶(propidiium iodide,PI)来测定。用考马斯亮蓝法测定细胞内总蛋白量。用图像分析软件(Leica图像分析软件)测细胞表面积。
结果：
①4umol/L,8umol/L,16umol/L的ADMA分别能剂量依赖性使细胞内NO的含量减少35％,55％,73％(全部p<0.05),NOS的活性降低15％,23％,33％(全部p<0.05)。表明ADMA能够降低心肌细胞NO的功能。
②4umol/L,8umol/L,16umol/L的ADMA分别使细胞内DCF-DA的荧光信号增加27％,61％,120％(全部p<0.05)。表明ADMA能够增加心肌细胞内ROS的生成。③4umol/L,8umol/L,16umol/L的ADMA能够剂量依赖性的使心肌细胞内PI荧光信号(RNA含量)增加26％,66％,116％(全部p<0.05);使心肌细胞总蛋白含量增加11％,19％,32％(全部p<0.05);和心肌细胞表面积增加27％,49％,110％(全部p<0.05)。结论：
ADMA能够诱导心肌细胞肥大；在ADMA诱导心肌细胞肥大的过程中ADMA能够降低心肌细胞NO的功能；同时在细胞肥大的过程中ROS的生成也是增加的。
实验二左旋精氨酸抑制非对称二甲基精氨酸诱导的心肌肥大
目的：
为了探讨ADM诱导的心肌细胞肥大是否与NO的功能降低有关,采用NO的前提左旋精氨酸(L-arginine,L-arg)作抑制剂,观察L-arg对心肌细胞肥大的抑制作用。
方法：
用原代培养的新生大鼠的心肌细胞进行实验。细胞内荧光信号、总蛋白含量和心肌细胞表面积的检测方法同实验一。培养第四天的心肌细胞用L-arg(0.8mmol/L,1.6mmol/L,3.2mmol/L)作抑制剂和16umol/L的ADMA共同处理心肌细胞24小时后观察不同浓度的L-arg对心肌细胞ROS生成的影响。在细胞培养的第四天用上述各种因素处理培养的心肌细胞,第七天观察不同处理因素对心肌细胞内PI荧光信号、心肌细胞表面积和总蛋白含量的影响。结果：
①L-arg对ADMA诱导的心肌细胞内DCF-DA荧光信号的增强产生剂量依赖性的抑制作用。0.8mmol/L,1.6mmol/L,3.2mmol/L的L-arg能使ADMA(16umol/L)诱导的心肌细胞内DCF-DA荧光信号分别降低36％,48％,50％。
②L-arg对ADMA诱导的心肌细胞内PI(RNA含量)荧光信号的增强；心肌细胞表面积的增加；心肌细胞总蛋白含量的增加产生剂量依赖性的抑制作用。0.8mmol/L,1.6mmol/L,3.2mmol/L的L-arg能使ADMA(16umol/L)诱导的心肌细胞增强的PI荧光信号分别降低33％,47％,50％；使ADMA(16umol/L)诱导的心肌细胞增加的表面积分别降低30％,42％,43％；使ADMA(16umol/L)诱导的心肌细胞增加的总蛋白含量分别降低14％,19％,20％。
结论：
L-arg能够剂量依赖性的抑制ADMA诱导的心肌细胞的肥大。在L-arg抑制心肌细胞肥大的过程中ROS的生成也随着L-arg剂量的增加而生成减少。L-arg抑制心肌细胞肥大的作用可能与抑制ROS的生成有关。