论文部分内容阅读
目的通过体内外实验探究β-榄香烯是否通过减轻内质网应激损伤,促进损伤神经元的神经突起生长,促进大鼠脊髓损伤后运动功能恢复,为临床提供全新的治疗策略。方法首先通过CCK-8试验与LDH释放试验检测β-榄香烯在正常培养条件下对脊髓前角运动神经元细胞系VSC4.1细胞活力与毒性的影响。随后构建氯化钴模型模拟细胞缺氧损伤,CCK-8试验与LDH释放试验检测β-榄香烯对氯化钴损伤后的VSC4.1细胞活力与毒性的影响,流式Annexin/PI双染检测对氯化钴损伤后的VSC4.1细胞凋亡的影响。免疫印迹检测对照组、β-榄香烯给药组、氯化钴损伤组、β-榄香烯+氯化钴组内质网应激相关蛋白(grp78、chop)表达与凋亡相关蛋白(cleaved-caspase3)表达。随后我们运用免疫荧光染色观察β-榄香烯与Y27632对原代皮质神经元神经突生长情况,pull down试验检测两者对RhoA激酶活化影响,免疫印迹检测两者对RhoA通路下游limk与confilin蛋白磷酸化的影响。在体内实验中,我们运用Allen’s击打法进行脊髓损伤模型的构建,Tunel染色检测假手术组、损伤组与β-榄香烯治疗组脊髓前角运动神经元凋亡情况,免疫印迹检测神经突生长相关蛋白GAP43表达,BBB评分评价各组大鼠后肢运动功能。结果40 μg/ml浓度以下的β-榄香烯促进VSC4.1细胞在正常培养条件下增殖存活,并促进VSC4.1在氯化钴缺氧损伤下的存活。β-榄香烯治疗组与氯化钴损伤组相比,grp78、chop、cleaved-caspase12 和 cleaved-caspase3 蛋白表达显著性下降,凋亡细胞减少。β-榄香烯与Y27632促进原代皮质神经元神经突起的生长,β-榄香烯减少RhoA激酶活化,β-榄香烯与Y27632促进GAP43蛋白表达,抑制limk与confilin蛋白磷酸化。在大鼠实验中,β-榄香烯治疗减轻脊髓损伤后大鼠脊髓前角运动神经元凋亡,上调GAP43蛋白表达,BBB评分显著升高。结论一定浓度范围内的β-榄香烯通过减轻内质网应激减少运动神经元凋亡,促进其存活,并通过抑制RhoA通路促进脊髓损伤后大鼠神经元神经突起再生,最终促进大鼠运动功能恢复。