论文部分内容阅读
本研究以猪卵母细胞孤雌激活胚胎为实验材料,采用不同浓度的TSA和5-Aza-Cdr分别对孤雌激活之后的卵母细胞进行处理,研究其对胚胎发育的影响,并检测不同处理组中OCT4、Nanog、Bcl-2、BAX在囊胚期的相对表达量,以探讨表观遗传修饰剂处理对胚胎发育造成的影响。旨在优化核移植胚胎的体外培养程序,培养出更多质量更好的胚胎,为进一步的研究奠定基础,也为胚胎早期发育过程中表观修饰研究提供一定的佐证。
本研究包括以下主要内容:1.采用不同浓度的TSA处理猪卵母细胞孤雌激活胚胎24h,研究其对胚胎发育的影响。2.采用不同浓度的5-Aza-Cdr处理猪卵母细胞孤雌激活胚胎48h,研究其对胚胎发育的影响。3.TSA联合5-Aza-Cdr对猪卵母细胞孤雌激活胚胎进行处理,研究其对胚胎发育的影响。4.提取不同处理组的囊胚总RNA,采用Realtime PCR方法检测OCT4、Nanog、Bcl-2、BAX基因的相对表达量,研究药物处理对基因表达、胚胎发育能力的影响。
实验结果如下:
1.不同浓度的TSA处理对猪卵母细胞孤雌激活胚胎的卵裂率无显著影响(p>0.05);40nmol/L TSA处理猪卵母细胞孤雌激活胚胎24h,使囊胚率提升至43.8%,囊胚细胞数提升至45.1个,与其他各组相比均有显著差异(p<0.05)。
2.不同浓度的5-Aza-Cdr对猪卵母细胞孤雌激活胚胎的卵裂率及囊胚细胞数均无显著影响(p>0.05);30nmol/L5-Aza-Cdr处理48h囊胚率最高达到46.3%,与其他各组相比均有显著差异(p<0.05);且10nmol/L和20nmol/L5-Aza-Cdr处理组的囊胚率也显著提高,与对照组相比差异显著(p<0.05),但不如30nmol/L处理组的高。
3.40nmol/LTSA联合不同浓度的5-Aza-Cdr对猪卵母细胞孤雌激活胚胎的卵裂率和囊胚细胞数无显著影响(p>0.05);40nmol/L TSA+10nmol/L5-Aza-Cdr处理组囊胚率最高为37.5%,与对照组及其他处理组相比均差异显著(p<0.05)。
4.40nmol/L TSA处理猪孤雌激活胚胎24h,显著地提高了多能性相关基因OCT4及Nanog在囊胚中的相对表达量(p<0.05);对凋亡相关基因Bcl-2以及BAX的相对表达量则基本无影响,没有显著差异(p>0.05)。
5.30nmol/L5-Aza-Cdr处理猪孤雌激活胚胎48h,显著提高了Nanog基因在囊胚中的相对表达量,与对照组相比有显著差异(p<0.05);而对其他三个基因OCT4、Bcl-2、BAX的相对表达量则基本无影响,差异不显著(p>0.05)。