猪瘟分离毒E2基因序列分析和强弱毒检测方法的探讨

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本文以猪瘟流行毒自然感染发病猪的脾脏为材料,提取组织总RNA,根据已报道的CSFV E2基因序列设计合成特异性引物,以组织总RNA为模板,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定技术,对流行于江苏地区流行毒株的主要外膜糖蛋白E2基因的核苷酸序列进行了测定,用DNAStar软件比较分析了5株流行毒之间以及它们与猪瘟兔化弱毒株(C-株)E2基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性,分析了猪瘟流行毒的变异程度及其与C-株的分子差异,并通过系统进化树分析,确定其遗传关系,从分子生物学角度研究造成目前猪瘟仍频繁发生的可能原因。在此基础上,我们对已发表的强毒株石门株(SM株)、Brescia株、Altort-187株、Esystrup株和弱毒株GPE株、CS株、Riems株和C-株的序列进行酶切位点分析,找到强毒株在282bp处有一个AvaⅠ(BmeT110Ⅰ)酶切位点而弱毒株却没有。接着我们用限制性片段长度多态性分析法(RFLP)对PCR产物进行分析。从本研究结果看,用引物P1/P2和RFLP分析技术可作为将兔化弱毒和流行毒株区分开来的一种方法,而且应用该方法更方便、易行,这将对预防猪瘟有一定的实际意义。限于受检毒株的来源及数量,该方法的应用普遍性还有待于进一步的实验论证。
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