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干扰素(interferon, IFN)是在病毒或干扰素诱生剂的作用下,由特定细胞所产生的,具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的一类高活性、多功能分泌性糖蛋白,是动物机体抵抗病毒入侵的第一道防线。通常将干扰素分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型干扰素,在众多的干扰素类型中,以IFN-α的抗病毒活性最为显著。研究发现,体外表达的重组牛IFN-α (Bovine Interferon-a, BoIFN-a)对水泡性口炎病毒(VSV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)和副流感病毒-3(PIV-3)等病毒的复制和增殖具有抑制作用。巴斯德毕赤酵母表达系统是近年来发展最为迅速、应用最为广泛的外源蛋白表达系统之一,目前已利用该表达系统进行了多种动物干扰素的具活性表达。牛IFN-α多基因家族有10-12个亚型,目前已有其中8个亚型基因的克隆的相关报道,但尚无关于牛IFN-α多基因家族的系统研究及各个亚型的理化性质与生物活性的具体研究。因此,关于牛IFN-α各亚型的系统性研究具有重要意义。本研究以本实验室制备并保存的含有BoIFN-α1、 BoIFN-α7、BoIFN-α14(BoIFN-α1/7/14)完整开放阅读框的重组质粒为模板,采用PCR的方法扩增BoIFN-α1/7/14的成熟肽基因,利用在线软件对成熟肽基因进行序列分析,并利用巴斯德毕赤酵母表达系统实现了重组BoIFN-α1/7/14的无冗余氨基酸具活性分泌表达。随后,对重组BoIFN-α1/7/14的理化性质及生物学活性进行详细研究。结果显示,重组BoIFN-α1/7/14在毕赤酵母中实现了高效分泌表达,发酵液中的表达量分别为0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.163mg/mL;重组BoIFN-al/7/14对胰蛋白酶高度敏感、对热不敏感、耐酸,具有IFN-α的典型理化性质；通过细胞病变抑制法测得重组BoIFN-α1/7/14在MDBK细胞上抗水泡性口炎病毒(VSV)活性分别为6.55×106U/mg、3.50×106U/m、2.55×106U/mg,抗传染性鼻气管炎病毒(IBRV)活性分别为7.76×104U/mg,3.83×104U/mg、3.61×104U/mg,对MDBK细胞的生长具有抑制作用,抑制50%MDBK细胞增殖时的重组BoIFN-α1/7/14的浓度分别为4μg/mL、、8μg/mL、8μg/mL,且呈剂量依赖性。总之,本研究为高抗病毒活性、低细胞毒性的新型牛抗病毒制剂的研制提供了理论基础。