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近年来,随着我国半滑舌鳎人工育苗技术的日渐成熟,半滑舌鳎养殖业快速发展。然而,由细菌和寄生虫所引起的如腹水、烂鳍、烂尾等疾病的发生给半滑舌鳎养殖业造成了巨大损失,严重制约了半滑舌鳎养殖业的持续发展。哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是半滑舌鳎细菌性疾病的重要病源之一,能引起半滑舌鳎体表溃疡、烂鳍等疾病。目前,对于鱼类的哈维氏弧菌病,主要采取以预防为主,治疗为辅的方法,防治主要依赖于抗生素,但药物的滥用导致耐药性的产生,并对人体健康造成危害。结合家系选育、分子标记等辅助育种技术,筛选和培育出抗哈维氏弧菌优良品种,是解决半滑舌鳎感染哈维氏弧菌疾病问题的良好方式。本文主要从两个方面对半滑舌鳎抗哈维氏弧菌病进行研究。一方面通过筛选得到与抗哈维氏弧菌病相关的半滑舌鳎微卫星标记,另一方面对差异性标记进行QTL定位,以期为半滑舌鳎抗病优良品种的选育提供理论基础和依据。相应得到了下列结果:1、半滑舌鳎抗哈维氏弧菌病相关微卫星标记筛选本文采用混合分离子分析法(BSA)筛选出半滑舌鳎抗哈维氏弧菌病相关的微卫星标记(SSR)。以2014年哈维氏弧菌感染实验中存活率为52.22%的家系F1412(2014年12号家系)为材料,家系F1412中有易感群体151尾个体,抗病群体165尾个体。从半滑舌鳎高密度连锁图谱平均每隔10c M左右选取1个微卫星标记(SSR),共169个微卫星标记。首先从感病、抗病群体中各选15尾个体,组成抗病、感病基因池,确保基因池里每尾个体DNA浓度相同,对169个微卫星标记进行筛选,得到两个具有差异性的微卫星标记scaffold47923523、scaffold72771163,然后,用组成抗病、感病基因池的30个个体进行第一次单个体验证,scaffold47923523表现出显著性差异(P=0.003<0.05),scaffold72771163差异性消失(P=0.682>0.05);抗病、感病群体各取50尾进行第二次单个体扩大验证,结果表明scaffold47923523仍表现出显著性差异(P=0.00002<0.01)。将15条差异条带切胶回收,挑单克隆测序,进行BLAST比对后,同源性高达98%,确认其为scaffold47923523中的一段序列。结果表明scaffold47923523可能与半滑舌鳎抗哈维氏弧菌病相关。2、半滑舌鳎抗哈维氏弧菌病性状相关基因座定位(QTL)本文用scaffold47923523所在的连锁群LG18上的37个SSR对94尾抗病、感病个体进行基因分型,抗病、感病群体各取47尾,用软件Joinmap4.0软件构建新的遗传连锁图谱,得到3个新的图谱:整合图谱(LG18)、雌性图谱(LG18F)和雄性图谱(LG18M)。采用Win QTLCart2.5进行单标记分析和QTL定位,单标记分析中,模式一得到3个显著性相关标记(scaffold447571287、scx9-1、cyse80,P<0.05)和1个极显著性标记(scaffold080437,P<0.01);模式二中有4个标记是显著相关性(hncyse110、scaffold41419940、scaffold447571287、cyse80)和1个标记是极显著相关性(scaffold080437),QTL定位得到3个QTL区间,图谱LG18F定位出一个区间q E-F1,图谱LG18M得到q E-M1、q E-M2两个区间,其LOD峰值、分辨率分别为q E-F1:46.5、87.36%,q E-M1:3.7、64.18%,q E-M2:5.0,65.26%,在全基因组序列的分布范围上,区间q E-F1分布范围最广,包含了区间q E-M1及q E-M2,因此q E-F1更可能与抗病性状相关。