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牙周炎是人类最古老的口腔感染性疾病之一,在世界范围内均有较高的患病率。牙周炎危害牙周及口腔健康,是导致成年人牙齿丧失的主要原因。随着我国进入老龄化社会,牙周炎将成为更为突出的口腔健康问题。防止牙槽骨吸收,稳定以及重建牙槽骨是治疗牙周病的关键。中医药注重整体观念,辨证施治,河北省中医院口腔科应用补肾活血固齿方治疗牙周炎取得了较好的临床效果,但其作用机理尚不清楚。成骨细胞是牙周组织中的重要细胞,在骨合成代谢中起着核心作用,在骨的生长发育以及修复中起着重要作用。骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)具有诱导新骨形成的能力,I型胶原蛋白(Collagen TypeⅠ,COLⅠ)是成骨细胞合成的特殊性胶原蛋白,是成骨细胞向基质成熟方向分化的标志。本实验通过观察补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)BMP2表达及COLⅠ合成的影响,研究该方剂成骨的作用机制,为临床应用该药治疗牙周炎提供理论依据。目的:补肾活血固齿方灌胃SD大鼠一周,取大鼠的含药血清,作用于体外培养的小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1细胞),应用ELLISA法检测细胞培养上清液BMP-2表达;利用免疫组化及q RT-PCR技术观察补肾活血固齿方对COLⅠ合成的影响,探讨该方剂治疗牙周炎作用机理。方法:1 MC3T3-E1细胞株的培养2补肾活血固齿方按体表面积折算等效剂量灌胃大鼠,制备含药血清;等剂量的生理盐水灌胃大鼠,制备无药血清作为对照组;10%胎牛血清作为空白对照组。3 ELLISA法检测补肾活血固齿方作用MC3T3-E1细胞24h、48h、72h时,细胞培养上清液BMP-2表达。4 q RT-PCR法检测补肾活血固齿方作用MC3T3-E1细胞24h、48h、72h时,对COLⅠm RNA表达的影响。5免疫组织染色法检测补肾活血固齿方作用MC3T3-E1细胞72h时,对COLⅠ合成的影响。结果:1补肾活血固齿方作用MC3T3-E1细胞24h,48h,72h,细胞培养上清液BMP-2表达含药血清组细胞培养上清液光密度值明显高于无药血清组和胎牛血清组,统计结果显示差异有显著性(P<0.05),无药血清组和胎牛血清组上清液光密度值比较,统计结果显示无显著性差异(P>0.05)。2补肾活血固齿方含药血清作用于MC3T3-E1细胞24h,48h,72h对COLⅠm RNA表达的影响3组细胞经培养后随着时间的延长,COLⅠm RNA表达逐渐增多。无药血清组、胎牛血清组细胞的COLⅠm RNA表达,经统计学分析无明显差异(P>0.05)。含药血清组COLⅠm RNA表达比其他两组明显增多,有统计学差异(P<0.05)。3补肾活血固齿方含药血清作用于MC3T3-E1细胞72h,对COLⅠ合成的影响镜下见含药血清组细胞的细胞质呈深棕黄色染色;无药血清及胎牛血清组细胞的细胞质呈浅棕黄色染色。细胞质染色强度分析采用χ2检验,胎牛血清组与无药血清组染色强度差别无统计学意义;含药血清组与胎牛组染色强度差别有统计学意义;含药血清组与无药血清组染色强度差别有统计学意义。结论:补肾活血固齿方能上调成骨诱导因子BMP2的表达,诱导MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化;促进MC3T3-E1细胞合成COLⅠ,促进成骨细胞分化成熟,促进骨的形成。补肾活血固齿方通过促进牙槽骨的再生,对牙周炎的治疗发挥作用。