【摘 要】
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[目的]
1.建立人肥大细胞羧肽酶(human mast cell carboxypeptidase,hMC-CP)的双抗体夹心ELISA检测方法。
2.构建hMC-CP真核表达载体。
[方法]
1.hMC-CP
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[目的]
1.建立人肥大细胞羧肽酶(human mast cell carboxypeptidase,hMC-CP)的双抗体夹心ELISA检测方法。
2.构建hMC-CP真核表达载体。
[方法]
1.hMC-CP的ELISA方法的建立
(1)按方阵滴定法进行双抗体工作浓度的确定
(2)重复性实验
(3)灵敏度实验
(4)利用上述建立的ELISA方法,检测临床血清标本中的hMC-CP。
2.hMC-CP真核表达载体的构建
(1)设计特异引物,扩增完整的hMC-CP编码区基因,亚克隆入真核表达质粒 pcDNA3.1,构建hMC-CP真核表达载体。
(2)设计特异引物,用人免疫球蛋白κ链的信号肽编码序列置换hMC-CP基因自身信号肽编码序列,扩增产物亚克隆入真核表达质粒pcDNA3.1,构建hMC-CP分泌型真核表达载体。
[结果]
1.成功建立了hMC-CP的双抗体夹心EIASA检测方法。
2.用建立的ELISA方法初步检测了尘螨过敏患者的血清和正常对照者的血清,结果显示尘螨过敏患者血清中hMC-CP的水平显著高于正常对照血清组(p＜0.01)。
3.成功构建带有自身信号肽编码序列的hMC-CP的真核表达载体。
4.成功构建了含人免疫球蛋白κ链信号肽编码序列的hMC-CP的分泌型真核表达载体。
[结论]
1.成功建立了hMC-CP的ELISA检测方法,经检索,目前国内外尚未见有类似研究报道,为进一步研究hMC-CP的生物学功能奠定了基础。
2.分别构建了含有自身信号肽编码序列和人免疫球蛋白κ链信号肽编码序列的hMC-CP真核表达载体,为进一步hMC-CP的真核表达及其功能研究奠定了基础。
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