【摘 要】
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目前世界上已报道的甘薯病毒有23种,它们通常以复合侵染的形式感染甘薯,并且这种复合病毒对甘薯造成的危害比任意单一种病毒侵染所造成的危害更严重。同时,甘薯病毒难以纯化也给
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目前世界上已报道的甘薯病毒有23种,它们通常以复合侵染的形式感染甘薯,并且这种复合病毒对甘薯造成的危害比任意单一种病毒侵染所造成的危害更严重。同时,甘薯病毒难以纯化也给甘薯病毒病的研究工作带来一定难度。常规育种尽管能在有效的评价方法的基础上筛选出较耐病毒品种,但通常规模大耗时长并且存在一定的难度,而由蛋白质介导的抗性具有广谱性。针对甘薯病毒病的复杂性,在蛋白质水平对甘薯复合病毒进行抗性相关的研究,可以得到与甘薯耐复合病毒相关的蛋白,为甘薯的复合病毒抗性机制研究提供理论基础,并在建立快捷有效的评价标准基础上对甘薯进行抗病育种筛选。本研究以耐病品种“广薯128”和高感品种“广薯2k—69”为材料,采用蛋白质组学方法,通过双向电泳技术对甘薯材料在感病前后的叶片蛋白质双向电泳图谱的变化进行了检测。主要结果如下:
为得到高质量的甘薯叶片蛋白,本文尝试了三氯乙酸/丙酮法、缓冲液法、缓冲液/苯酚法、苯酚法4种方法提取甘薯叶片蛋白,通过比较不同提取方法的蛋白提取效率、单向SDS-PAGE凝胶电泳图谱背景清晰度、蛋白条带分辨率及蛋白条带数量筛选出最佳的制备方案。结果显示,苯酚法尽管从叶片提取蛋白的效率最低(8.33±0.22mg/gFW),但SDS-PAGE凝胶图谱背景清晰,所呈现的蛋白条带分辨率最高,条带数最多,高达32条。因此选用苯酚法提取叶片蛋白并用于双向电泳研究分析。
蛋白双向电泳结果表明,“广薯128”、“广薯2k—69”在病毒侵染前后蛋白质都发生变化。“广薯128”在嫁接接种病毒后消失的蛋白点有3个,新出现的蛋白点有12个,表达量上调3倍以上的蛋白点有14个,表达量下调3倍以上的蛋白点有10个;“广薯2k—69”在嫁接接种后消失的蛋白点有8个,新出现的蛋白点有5个,,表达量上调3倍以上的蛋白点有13个,表达量下调3倍以上的蛋白点有23个。这些差异蛋白点有待质谱鉴定和分析。
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