黄连解毒汤对自发性高血压大鼠降压作用的研究

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目的:本课题以黄连解毒汤(HLJD)为研究对象和自发性高血压大鼠(SHR)为动物模型,分别从实验动物血压、组织结构和基因表达及血液等相关指标来探讨HLJD对SHR血压、血管结构的改善作用和胸主动脉内Rhoa、eNOS基因表达的影响,以探讨黄连解毒汤在治疗高血压方面的研究。  方法:1.血压检测:BP-6无创尾动脉压分析系统于用药前检测各组大鼠血压一次及用药后每周检测各组大鼠血压变化一次。2.血清NO的检测:腹主动脉取血后,室温放臵待血液凝固,血清析出,于低温离心机离心,立即用硝酸还原法检测NO含量。3.ELISA法检测:对SHR血清中血管内皮素ET-1、血管性假血友病因子vWF和一氧化氮合酶NOS、钙调素CAM含量的检测。4.电镜对内皮超微结构的观察:通过透射电镜主要观察胸主动脉细胞间连接,细胞形态、核内细胞器等超微结构的变化。5.胸主动脉Rhoa及eNOS mRNA的检测:超低温冰箱保存的标本,提取mRNA,逆转录得cDNA,扩增内参以检测逆转录效果,荧光定量PCR检测Rhoa及eNOSmRNA表达状况。  结果:1.SHR血压的变化:SHR随着周龄增加血压逐渐升高,6周后模型组血压显著高于治疗前(P<0.01)。与模型组相比,黄连解毒汤各剂量组和阳性组均能显著地降低大鼠的血压,至给药结束后,黄连解毒汤高剂量组与阳性组降压效果相当(P>0.05)。在整个实验过程中,黄连解毒汤组起效较慢,而阳性组则在用药的初期血压就下降。2.血清NO的检测、ELISA法检测NOS、ET-1、VWF、CAM:与空白组比较,模型组动物血清NO水平显著降低(P<0.01),血清中ET-l与VWF水平显著升高(P<0.01),NOS与CAM水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,阳性组和HLJD各组NO水平均明显提高(P<0.01),ET-1与vWF水平降低(P<0.05或P<0.01),NOS与CAM水平提高(P<0.01或P<0.05)。3.电子显微镜:透射电镜下 HLJD能使自发性高血压模型大鼠胸主动脉超微结构的改变得到明显逆转,明显减轻SHR大鼠内皮细胞超微结构的损伤,减轻细胞肿胀、细胞器的外漏,保持线粒体排列整齐、血管内皮细胞间隙正常;使主动脉内皮细胞基本保持完整形态,无核坏死,内弹力板较完整,均匀。这种保护作用较阳性组作用差异不显著。4.荧光定量PCR检测:自发性高血压组大鼠胸主动脉eNOS活性较空白组明显降低(P<0.01),HLJD高剂量能够降低高血压大鼠胸主动脉 Rhoa的表达(P<0.05),并能提高高血压大鼠胸主动脉eNOS的表达(P<0.01),于阳性组相比(P>0.05)。  结论:1. HLJD及阳性对照药卡托普利对自发性高血压大鼠的血压均有明显的改善作用,从降压效果看,HLJD高剂量组有良好的降压作用,起效较阳性组慢。2. HLJD升高血清中NO、NOS、CAM含量,降低ET-1和vWF的含量,故可认为HLJD具有一定血管保护作用。3. HLJD能改善SHR血管内皮结构。4. HLJD对SHR胸主动脉内Rhoa和eNOS的表达均有作用,能够降低高血压大鼠胸主动脉Rhoa的表达,并能提高高血压大鼠胸主动脉eNOS的表达。
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