随着SELEX技术的发展,核酸适配体作为一种特异性强、适用范围广、修饰性强的新型配基分子在生物学检测、疾病诊断、药物的开发和筛选方等面发挥着越来越重要的作用。核酸信标配基作为核酸适配体的延伸,其既具有配体识别能力又具有信号扩增能力,是一种新型的、易于构建、特异性强、灵敏度高、使用范围广的检测分子。琼脂磁性微球是磁性高分子微球的一种,其兼有有机材料的可塑性、易加工性和生物兼容性,又具备无机材料的刚性、磁响应性等特点。这种特性让琼脂磁性微球在酶的固定化、生物分离、医学与环境等方面的应用越来越广泛,也使其成为核酸信标配基检测的理想载体。本实验将磁性微球作为载体,结合核酸信标配基建立一种新型微量蛋白检测方法。为了检测技术的成功建立,本实验利用化学共沉淀法、反向聚合包埋技术以及官能基团修饰等方法成功制成了三种磁性微球:琼脂糖磁性微球、环氧基化磁性微球和羧基化磁性微球,并通过显微镜观察、滴定分析法和酶联免疫法对这三种磁性微球进行了表征与活性鉴定,最后选择了羧基化磁性微球作为后续实验的载体;经过不断的摸索实验,确立了该检测技术的基本流程,即利用羧基化磁性微球固定靶蛋白,与特异性核酸信标配基结合,经过电泳分离,完成靶蛋白到核酸信标的信号转换,再采用实时定量-PCR技术对核酸信标分子快速定量检测,完成实时定量-PCR对靶蛋白的间接定量检测。为了达到最佳的检测效果,对电泳分离方法的选择,电泳温度、时间、电压电流等各项条件进行了优化改进,得出电泳分离的最佳条件是在0.5×TBE缓冲溶液中,电泳温度保持在1℃,每管电泳电流恒定在10 mA,电泳40分钟,又对该方法的特异性、重复性及准确性进行了实验验证,结果表明优化后的核酸信标配基-PCR检测对特异性靶蛋白识别性强,灵敏度高,定量准确,具有可行性。本技术将核酸信标配基的信号扩增特性与琼脂磁性微球的载体特性结合起来,并采用电泳作为配基筛选分离手段,再通过实时定量PCR完成对靶蛋白的间接定量检测,为定量检测靶蛋白提供一种快速、灵敏、实用的技术方法。