【摘 要】
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目的:研究点突变的PP2Aα基因对单克隆抗体N-35相关蛋白N35表达的影响,探讨其作为云南个旧肺腺癌基因实验研究及诊断治疗新的靶基因的可行性。方法:将云南个旧肺腺癌GLC-82细
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目的:研究点突变的PP2Aα基因对单克隆抗体N-35相关蛋白N35表达的影响,探讨其作为云南个旧肺腺癌基因实验研究及诊断治疗新的靶基因的可行性。方法:将云南个旧肺腺癌GLC-82细胞作为靶细胞,点突变的PP2Aα基因作为靶基因,设计并构建shRNA质粒表达载体,通过阳离子脂质体LipofectamineTM2000导入GLC-82细胞,经G418筛选阳性克隆细胞并扩增,观察转染后细胞生长增值情况及采用蛋白质印迹法(Western Bloting)检测N35表达量的变化.结果:shRNA质粒表达载体均成功导入GLC-82细胞并在含有G418培养基中长时间筛选、阳性细胞克隆及扩增;转染了质粒pGenesil-1-PPP2CA1的GLC-82细胞较未转染者N35表达量明显减少并且生长增值速度减慢,而转染了质粒pGenesil-1-PPP2CA2、pGenesil-1-PPP2CA3、pGenesil-1-PPP2CA4、pGenesil-1-HK、pGenesil-1-GAPDH-A、pGenesil-1-KB的GLC-82细胞较未转染者N35表达量未明显减少且细胞生长增值速度未见明显变化。结论:RNA干扰(RNA Interference RNAi)是一门强大且特异的影响基因表达技术;质粒pGenesil-1-PPP2CA1可以在获得一定转染效率的基础上有效抑制GLC-82细胞中N35蛋白的表达并抑制细胞生长;点突变的PP2Aα基因是重要的肺癌相关基因,有望成为肺癌基因诊断和治疗的新的靶基因。
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