菠萝蛋白酶主要存在于菠萝的茎、叶、皮中，经提取、纯化、浓缩、酶固定化得到纯天然的植物蛋白酶。它在医药、美容上有显著的医疗作用，比如消炎，抗水肿，改善体液循环，抑制肿瘤细胞的成长。其作为一种菠萝的天然提取物，如何高效地将其从菠萝皮中萃取出来，是本篇论文的主要研究内容。　　双水相萃取技术作为一种理想的生化分离技术具有萃取效率高，操作步骤简单，萃取时间短，成本低，易于放大等优点，目前已经广泛用于食品工业、生物工程、医药工业等行业中。本实验研究了温敏聚合物L61-盐双水相体系的浊点和液液相平衡行为，为双水相技术的实际应用提供了坚实的理论依据。使用温敏聚合物 L61-K2HPO4双水相体系循环萃取菠萝蛋白酶，获得了较为理想的萃取效果。具体研究内容如下：　　(1)研究了各种盐析能力的盐对温敏聚合物L61浊点的影响。L61的浊点随着电解质的加入而降低，并且随着电解质浓度的增大呈线性下降。①研究钠盐得到，一价阴离子降低浊点的能力为OH->Cl->Br-；二价阴离子降低浊点的能力为HPO42->CO32->SO42-；不同价态阴离子降低浊点的能力为PO43->CO32->Cl-；②研究硫酸盐得到，二价阳离子降低浊点的能力为Zn2+>Fe2+>Mn2+；③研究钾盐得到，不同价态阴离子降低浊点的能力HPO42-NH4+。　　(2)测定了温敏聚合物 L61-(NH4)3C6H5O7/K2HPO4/K3C6H5O7双水相体系的液液相平衡数据。发现随着盐浓度不断增加，双水相体系出现相倒转现象，同时探讨了不同种类的盐和温度对相倒转的影响。结果表明，三种盐的相倒转能力为(NH4)3C6H5O7>K2HPO4>K3C6H5O7；随着温度的升高，发生相倒转所需盐量下降，盐的相倒转能力增强。此外，成功利用经验拟合方程对双水相体系（相倒转前后）的液液相平衡数据进行拟合，拟合的效果较好，R2=0.9935。同时得到温敏聚合物L61-盐双水相体系的成相能力会随着温度的升高而增强，三种盐的相分离能力的大小顺序为 K3C6H5O7>(NH4)3C6H5O7>K2HPO4.　　(3)在单因素的基础上探讨菠萝蛋白酶的最佳存储条件，构建了温敏聚合物L61-K2HPO4双水相体系循环分离纯化菠萝蛋白酶。实验结果表明菠萝蛋白酶富集到聚合物相（上相），杂质蛋白分离到盐相（下相）。该实验测定了盐的浓度、聚合物种类和浓度对菠萝蛋白酶分离纯化效果的影响。在最佳条件下，菠萝蛋白酶的一次萃取酶活回收率和纯化因子分别为68.6％和6.53；二次萃取，循环利用聚合物，酶活回收率和纯化因子分别达到62.5%和9.21。效果优于其他双水相体系。