【摘 要】
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本课题通过对一条天然长非编码RNA进行改造,开发了第一个在转录后翻译前水平特异性促进蛋白表达的通用技术——RNAe(RNA enhancement)。它不改变靶标mRNA,通过招募多聚核糖体
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本课题通过对一条天然长非编码RNA进行改造,开发了第一个在转录后翻译前水平特异性促进蛋白表达的通用技术——RNAe(RNA enhancement)。它不改变靶标mRNA,通过招募多聚核糖体的形式来加速它的翻译进程。RNAe结构简单,全长约1.3k个核苷酸(nucleotide,nt),主要包含配对区、反向SINEB2元件和部分ALU三个元件。RNAe构建简易,且具有高度的靶向特异性和广泛的适用性(哺乳动物细胞)。通过检测RNAe对抗体10E8促进作用和对细胞增殖相关基因的筛选效果,我们揭示了该技术在抗体生产和高通量基因筛选中的广阔的应用前景。根据RNAe的充分必要元件,我们从小鼠基因组和转录组中筛选出17k条具有RNAe功能的lncRNA,且4/8个SINEB2获得验证。说明在细胞中,这是一类长非编码RNA,具有较高的研究价值。RNAe在研究及应用中存在的问题促使我们对其机制的探索。RNAe的自身因素有:从一级结构来讲,RNAe功能的充分必要条件是与靶标的配对区及反向SINEB2元件;从二级结构来讲,RNAe功能的关键结构是SINEB2中的环结构。同时我们验证了两个RNAe结合蛋白ILF3和eIF4A1,但不能确定它们是否是RNAe的功能蛋白。
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