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猪轮状病毒(Porcine Rotavirus)是危害养猪业的主要病毒性腹泻病原之一，本研究以猪轮状病毒OSU株为材料，对轮状病毒的细胞培养关键技术、病毒感染仔猪的症状和病变进行了研究，并建立了检测猪轮状病毒的间接夹心ELISA方法。本研究确立了猪轮状病毒最佳培养条件，并进行了病毒人工感染试验。病毒经20μg／mL胰酶处理1h，接种细胞于37℃吸附2h，用含4μg／mL胰酶的维持液(MEM)培养，连续传至10代细胞出现葡萄串状堆积、胞浆相连、拉网等病变。透射电镜观察到病毒粒子呈圆形车轮状，直径约为80nm。病毒口服感染3日龄未食初乳仔猪，于感染后10h出现腹泻，粪便呈黄色水样混有白色絮状物，接种后42h死亡。剖检可见胃内有凝乳块，肠壁变薄充满液体，盲肠、结肠充气。主要病理变化：肠腔内积有多量脱落的上皮细胞和炎性渗出物，其中混有红细胞；肠上皮细胞变性、坏死、脱落；固有膜毛细血管高度扩张、充血，并伴有轻微出血；严重者粘膜上皮大量脱落，裸露出固有膜；粘膜下层水肿、增厚，炎性细胞浸润。建立了检测猪轮状病毒抗原的间接夹心ELISA。采用超速离心从病毒细胞培养物提纯病毒分别免疫猪和兔，制备的高免血清用硫酸铵沉淀法粗提IgG，再分别通过羟基磷灰石及阴离子交换层析，得到纯化的猪抗RV IgG和兔抗RV IgG，建立检测猪轮状病毒的间接夹心ELISA。试验确定了ELISA最佳工作条件：猪抗RV IgG包被浓度为4μg／mL，4℃包被过夜；封闭液为1％牛血清白蛋白(BSA)，37℃封闭60min；抗原孵育条件为37℃90min；兔抗RV IgG浓度为3.5μg／mL，37℃孵育90min；酶标羊抗兔抗体浓度为1：8000，37℃孵育90min；底物作用时间为15min。阴阳性结果判定的临界OD值为0.161。重复性试验表明该方法重复性较好。间接夹心ELISA不与猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒、猪细小病毒、乙脑病毒、大肠杆菌、猪传染性胸膜肺炎杆菌呈现交叉反应，特异性好。敏感性试验测定最低抗原检出量为1.25μg／mL。包被的酶标板在-20℃、4℃和常温中，至少可以保存4周。本研究确立了猪轮状病毒最佳培养条件，复制出该病毒感染仔猪的急性病例，建立了间接夹心ELISA诊断方法，为该病的快速准确诊断和深入开展病原学研究奠定了基础。