【摘 要】
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由于过度使用抗生素和消毒剂等药物,促使许多微生物产生了耐药性突变,细菌的耐药性已成为一个全球性的问题,研究开发新型的抗菌材料是一种必然途径。纳米银作为无机非抗生素类抗
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由于过度使用抗生素和消毒剂等药物,促使许多微生物产生了耐药性突变,细菌的耐药性已成为一个全球性的问题,研究开发新型的抗菌材料是一种必然途径。纳米银作为无机非抗生素类抗菌材料,具有比表面积大、抗菌活性高、抗菌谱广、毒性低且不产生耐药性等特征,对细菌、真菌及支原体等致病微生物具有很强的杀菌能力,同时具有抗HIV-1病毒活性作用。纳米材料在医疗和保健领域显示出来广阔的应用前景,目前主要被开发用于外科器械、绷带、抗菌涂料和纺织品的原料。研究表明,纳米银抑菌机理主要有以下几种假说:菌体内容物泄漏、脱氢酶失活、产生活性氧、损伤DNA及中断细胞信号传导等,但其具体作用机制尚不明晰。 本研究通过一个低耗能、简单的方法制备纳米银-石墨烯复合材料AgNPs-GE,并测试了其UV-vis、X射线衍射(XRD)、X射线光电子能谱(XPS)、拉曼(Raman)等一系列表征,通过琼脂扩散法,MIC值和MBC值的测定以及SEM测试,表明Ag NPs-GE复合材料具有较强的抑菌杀菌能力,菌种的敏感性顺序为革兰氏阴性菌>革兰氏阳性菌>真菌。 通过MTT法和台盼蓝染色法检测了Ag NPs-GE的生物安全性。参考AgNPs-GE对于大肠杆菌、绿脓杆菌以及金黄色葡萄球菌的MIC值和MBC值,在10 ppm浓度下Ag NPs-GE能够有效抑制细菌生长,在15 ppm时能够杀死几乎全部细胞。而用10 ppm的Ag NPs-GE处理人肝癌细胞系HepG2,其存活率达到93%以上。 通过双向电泳结合质谱的蛋白质组学方法,以及生物信息学研究Ag NPs-GE对菌体蛋白产生的影响。对所获得的28个差异蛋白进行gene ontology分析和KEGG pathway分析,得出经过Ag NPs-GE和硝酸银处理诱导菌体的主要代谢途径变化。结果表明Ag NPs-GE能够上调微生物外膜结构蛋白Pag1、运动蛋白PilH等一系列蛋白的表达量,而硝酸银作用相反;Ag NPs-GE和硝酸银均能下调8个与蛋白质翻译相关蛋白的表达量。 研究表明电荷性质及电荷量的多少会对纳米银对细菌的吸附能力及杀菌性能有较大影响。细胞表面带负电荷,因此我们制备了带正电荷的新型纳米银,Ag/AgCl/PDDA/GE复合材料和Ag NPs-PDDA溶胶,其抑菌杀菌性能显著增强。Ag/AgCl/PDDA/GE复合材料浓度为1 ppm时,在2h就能杀死全部的绿脓杆菌;Ag NPs-PDDA溶胶P3浓度为0.5 ppm时,在0.5 h内就能杀死全部的细菌。
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