【摘 要】
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卡介苗热休克蛋白65(HSP65)是分支杆菌属的主要免疫蛋白之一,在一定条件下可以作为免佐剂的免疫载体.通过PCR,克隆到HSP65的全基因,构建了高效的表达载体,HSP65于E.Coli BL21
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卡介苗热休克蛋白65(HSP65)是分支杆菌属的主要免疫蛋白之一,在一定条件下可以作为免佐剂的免疫载体.通过PCR,克隆到HSP65的全基因,构建了高效的表达载体,HSP65于E.Coli BL21的细胞质中表达,通过细胞破碎和DEAE DE52柱层析,初步分离到较纯的HSP65.人血管内皮生长因子121(VEGF121)具有很强的有丝分裂原活性,特异性的作用于各种血管的内皮细胞,是肿瘤生长和维持的比不可少的生长因子.从实验室构建的表达VEGF121的质粒出发,VEGF121以包涵体的形式表达,通过包涵体的分离和洗涤,在还原条件下用4mol/L的尿素溶解包涵体,还原条件下透稀除去尿素,经Sephacral DEAE柱层析纯化后,得到VEGF121单体,单体在pH8.5的非还原条件下复性成VEGF121二聚体.为提高VEGF121的免疫原性,将VEGF121和HSP65通过化学偶联剂戊二醛偶联形成复合物,该复合物能够诱导ICR小鼠产生抗VEGF121的抗体,但免疫后的小鼠中未能对S180实体瘤的攻击产生免疫抑制作用.
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