近年来，世界各地埃可30型肠道病毒(Echovirus 30，Ech030)相关疾病暴发逐渐增多，我国也连续有多起暴发报道。2003年1月至7月，在我国江苏省北部地区发生的较大规模的儿童无菌性性脑膜炎暴发流行中，本课题组从患者脑脊液中分离到了Echo30病毒，首次明确本次感染的病原，并对该病毒的生物学特性进行了相关探讨。本研究在此基础上，依次建立了Echo30国内流行株血清特异性IgG抗体的间接免疫荧光试验(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。并初步用于了解人群的Echo30型无菌性脑膜炎隐性感染情况调查。 在IFA技术建立过程中，我们使用细胞爬片法，用分离得到的毒株感染人胚肺二倍体细胞(MRC-5)制备抗原片，优化了IFA染色程序，确定1:100和1:200两个血清稀释度，1:200的异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗人及抗鼠IgG稀释度及伊文氏兰衬染为最佳染色条件。用建立的IFA技术筛检了71份非暴发地区儿童血清，其中得到12份为阳性，59份为阴性；47份暴发地区儿童血清中，22份为阳性，25份为阴性。研究发现人群中存在Echo30型无菌性脑膜炎隐性感染者。所建立的IFA技术有较好的灵敏度，可初步用于小范围人群的血清学检测，但并不适用于大面积人群的血清流行病学调查。因此，本研究进一步探讨了Echo30 IgG抗体的间接ELISA检测方法。 研究使用分离得到的Echo30病毒株全病毒作为ELISA反应体系的抗原，用棋盘滴定法确定ELISA检测最佳条件，据阴性样品OD值分布情况确定cutoff值，建立反应体系。结果确定ELISA反应的最佳抗原包被浓度为2.5μg/ml，血清检测最佳稀释度为1:200，HRP-羊抗人IgG理想稀释度为1:5000，Cutoff值定为0.291。研究对ELISA检测结果和IFA检测结果做了比较，并以IFA为标准对ELISA的灵敏度和特异度进行了评价。结果确定ELISA检测结果与IFA结果一致率达89.1％，一致性检验Kappa值为0.742，ELISA的灵敏度和特异度分别为81.8％和92％。提示两种检测方法在可信度上差别不大，均可用于检测血清抗体，但根据两种技术的操作特点，ELISA技术更适用于大面积人群的血清流行病学调杳。 为了了解人群Echo30国内流行株引起的无菌性脑膜炎隐性感染情况及保护性分布情况，探索Echo30病毒感染的危险因素，我们使用所建立的ELISA方法，对来自上海市不同年龄的412名健康人和来自浙江省德清县的289名成人健康体检者血清进行了Echo30 IgG抗体检测，并进行了相应比较分析。通过对上海市区人群的分析发现1岁以下婴幼儿中未见抗体阳性者，15岁以下儿童抗体阳性率较低(10％～16.7％)，15岁以上人群抗体阳性率水平明显升高(45.0％～46.7％)。孕妇与普通人群抗体阳性率无显著性差异。提示上海市人群中存在隐性感染者，人群通过自然感染获得免疫保护，15岁以下儿童为Echo30感染及发病的高危人群，母体传递给婴幼儿的抗体水平较低，不能为婴幼儿提供先天性免疫保护。对浙江农村人群的分析发现浙江农村成人的隐性感染情况和上海人群基本相似。在这部分调查中，我们对Echo30病毒感染的危险因素进行了单因素和多因素分析，遗憾的是，并未发现有显著统计学意义的危险因素。 目前，我国尚缺乏常规的肠道病毒监测系统，Echo30信息资料严重不足，我们对引起多次脑膜炎暴发的Echo30具体传播途径尚不清楚。根据本研究的结果，我们推测Echo30病毒的一般感染可能和儿童时期的特殊行为习惯有关。如果出现某种特别的危险因素，使Echo30病毒有更多的机会接触缺乏保护性抗体的儿童，就可能引起无菌性脑膜炎的暴发。因此在以后的研究中，需要进一步改善血清学调查技术，开展更大范围的血清流行病学调查工作，结合现场流行病学工作和相关病毒信息，完善病毒监测体系，继续探索病毒在人间传播的关键环节，从而为疾病控制工作提供更为精确的理论指导。