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第一部分HCV(Ib型)NS5A真核表达载体构建及凋亡相关基因表达谱芯片分析目的：构建HCV(Ib型)NS5A真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)-HCV NS5A，研究NS5A蛋白对人肝癌细胞凋亡相关分子表达的影响。方法：以丙肝患者血清HCV RNA（Ib型）为模板，逆转录PCR法获取NS5A基因序列，再将该基因连到pGEM-T Easy载体上，经Xho I和Hind III双酶切获得NS5A粘性末端，将NS5A粘性末端与同样经Xho I和Hind III双酶切的pcDNA3.1/myc-His(-)连接从而构建成NS5A的真核表达载体。用Western blot法鉴定NS5A基因在人肝癌细胞系HepG2中的表达。将转染了pcDNA3.1/myc-His(-)-HCVNS5A的HepG2进行表达谱芯片分析。结果：构建的真核表达载体经双酶切及测序鉴定正确无误，转染HepG2细胞系后Western blot检测显示HepG2大量表达myc-his-NS5A融合蛋白。芯片分析显示11条与凋亡相关的基因出现差异表达其中5条基因表达上调，6条表达下调。结论：成功构建了Ib型HCV NS5A的真核表达载体，利用表达谱芯片分析发现NS5A对肝细胞凋亡的作用可能涉及死亡受体通路、线粒体凋亡通路、DNA修复机制。第二部分NS5ATP9抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡目的：探讨HCV NS5A反式激活基因NS5ATP9对肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响。方法：将NS5ATP9基因表达质粒、NS5ATP9干扰RNA质粒及各自的对照空质粒转染到HepG2细胞系，48 h后换无血清培养基培养24 h诱导凋亡，用实时荧光定量PCR验证转染后NS5ATP9 mRNA表达水平的变化，用Annexin V/7AAD流式细胞术检测细胞凋亡，JC-1检测线粒体膜电位，Western blot技术检测Bax蛋白表达，以观察NS5ATP9对HepG2细胞血清饥饿诱导凋亡的影响。结果：Annexin V/7AAD检测结果显示，NS5ATP9过表达组和对照组相比早期凋亡和总凋亡率显著减少（P<0.05）；而NS5ATP9干扰RNA组的早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率均显著增加（P<0.05）。JC-1检测结果显示，NS5ATP9过表达组和对照组相比线粒体膜电位保持正常形式的比例增加（P=0.053），而出现去极化电位形式的比例显著减少（P<0.05），Δψm有增高趋势(P=0.324)；而NS5ATP9干扰RNA组线粒体膜电位保持正常形式的比例显著减少（P<0.05），Δψm有降低趋势（P=0.378）。促凋亡分子Bax蛋白Western blot检测结果显示，NS5ATP9干扰RNA组Bax表达量显著上升（P<0.05），NS5ATP9过表达组Bax表达量则有下降趋势（P=0.551）。结论：NS5ATP9基因抑制血清饥饿诱导的HepG2凋亡，其机制可能是通过线粒体途径。