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本研究以灭活的禽流感H5亚型病毒为抗原，对8周龄BALB／c小鼠进行免疫，应用淋巴细胞杂交瘤技术融合SP2／0骨髓瘤细胞和免疫后小鼠的脾淋巴细胞，进而采用HI试验筛选阳性杂交瘤细胞，并经过3次有限稀释法进行亚克隆，得到5株能够稳定分泌抗AIV H5亚型血凝素蛋白抗体的杂交瘤细胞株，分别将其命名为Al、A2、A4、A5和F4。经鉴定，Al、F4 2株单克隆抗体的免疫球蛋白亚型为IGG1，A2、A4、A5 3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚型为IgG2b。使用本试验获取的5株杂交瘤细胞对小鼠进行接种后，其腹水的HI效价均达13 log2以上，与H7亚型、H9亚型AIV及新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡产蛋下降综合征(EDS-76)病毒均无交叉反应。以饱和硫酸铵沉淀法纯化后的F4株腹水单抗作为包被抗体，鸡抗AIV H5亚型多克隆抗体作为二抗，建立了检测H5亚型AIV的双夹心ELISA方法。敏感性试验表明：该ELISA方法的敏感性可达到HI方法的4-8倍；特异性检测表明：该方法与H7亚型、H9亚型AIV及NDV、IBV、EDS-76病毒无交叉反应。将45批禽流感H5亚型灭活油乳剂疫苗破乳后提取抗原液，用建立的双夹心ELISA方法测其OD值，并与这些疫苗免疫本动物进行的效力检验HI抗体滴度作对比分析。结果表明：该ELISA方法可用于禽流感灭活油乳剂疫苗的定型检测；疫苗的OD值与本动物效力检验HI抗体滴度两组数据呈低度相关，目前，该ELISA方法用于替代疫苗本动物效力检验尚不成熟。