海南胡椒花叶病病原分子生物学鉴定及防治研究

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胡椒(Piper nigrum L.)是一种重要的热带香辛作物,素有“香料之王”的美誉,经济寿命长达20~30年。目前我国胡椒收获面积和产量分别居世界第6位和第5位,海南胡椒生产占全国90%以上。由黄瓜花叶病毒(Cucumber nosaic virus,CMV)引起的胡椒花叶病是生产上的重要病害之一,在海南危害日趋严重,然而对胡椒花叶病在海南的发生分布、变异进化、化学防治等还缺乏系统研究。本研究调查了胡椒花叶病在海南主栽区的田间发生情况,测定了4个CMV胡椒分离物的全基因组序列,开展病毒人工接种方法及化学防治技术研究。主要研究结果如下:1、2014~2015年期间,通过对海南琼海、文昌、海口、万宁及定安五个胡椒主栽区田间初步调查发现,胡椒花叶病在以上市县均有发生,主要症状为花叶、黄化、斑驳,叶片变小、变狭、卷曲皱缩,节间变短,生长缓慢等。调查的大部分胡椒园发病率在10%~20%,发病严重的胡椒园可高达87.5%。各市县中琼海的发病率最高达36%,发病最轻的为万宁7.5%,整个海南胡椒主栽区的平均发病率为14.4%。另外,调查中发现与槟榔、荔枝、柠檬等套种的胡椒园平均发病率为9.9%,而单一模式的胡椒园平均发病率为16.8%。2、对侵染海南胡椒的4个黄瓜花叶病毒分离物(CMV-WN、CMV-DA、CMV-FT、CMV-DS)的全序进行克隆和分析。CMV-WN、CMV-DA、CMV-FT及CMV-DS分离物RNA1全长在3359~3361个核苷酸(nt)之间,编码1a蛋白;RNA2全长在3042~3048 nt之间,编码2a和2b蛋白;RNA3全长在2216~2224 nt之间,编码3a和CP蛋白。序列一致性比较表明,CMV-WN、CMV-DA、CMV-FT及CMV-DS的RNA1、RNA2、RNA3均与CMV亚组IBCMV-SD序列一致性最高,编码的所有蛋白的氨基酸序列一致性也均与CMV-SD序列一致性最高,其中除了 2b氨基酸序列一致性低于90%外,其他蛋白的氨基酸序列的一致性均高于93.5%。RNA1、RNA2和RNA3序列进化树结果均显示4个分离物与CMV亚组IB的株系进化关系最近,但在RNA2和RNA3进化树中CMV-DA与其他三个分离物未聚在一起。RNA3的5’NTR结构分析以及RNA3 5’NTR核苷酸序列和CP氨基酸序列系统进化树分析表明4个CMV海南胡椒分离物均属CMV亚组IB。CP系统进化树中CMV-WN、CMV-FT、CMV-DS与云南胡椒分离物CMV-YNP聚成一簇,而CMV-DA与海南胡椒分离物CMV-HNP独立形成另一个分支。3、CMV人工接种胡椒苗,各处理均未出现胡椒花叶病症状,经ELISA检测,结果均为阴性。4、试验表明:盐酸吗啉胍·铜、宁南霉素(混合碧护、安融乐、满素可锌)、毒氟磷及寡糖·链蛋白的防治效果分别为47.0%、44.6%、48.1%和51.6%,经SAS 9.2软件以邓肯氏多重极差测验法分析表明四种药剂无显著性差异。
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