论文部分内容阅读
目的：观察茶叶功能成分配方对5/6肾切除合并高尿酸血症大鼠肾损伤的修复作用,并探讨其可能机制。方法：1、96只健康雌性清洁级SD大鼠随机分为四组：假手术组(Sham组)、5/6肾切除组(RK组)、5/6肾切除+氧嗪酸组(RK+OA组)、氧嗪酸组(OA组)。每组24只,分别于4周、8周、12周三个时间点收集24小时尿液后各处死8只大鼠,留取血、肾组织。2、120只健康雌性清洁级SD大鼠随机分为五组：假手术组(Sham组)、5/6肾切除组(RK组)、5/6肾切除+氧嗪酸组(RK+OA组)、5/6肾切除+氧嗪酸+茶叶功能成分组(RK+OA+Tea组)、5/6肾切除+氧嗪酸+别嘌呤醇组(RK+OA+AP组)。每组24只,分别于4周、8周、12周三个时间点收集24小时尿液后各处死8只大鼠,留取血、肾组织。3、双缩脲法测定尿蛋白含量；全自动生化分析仪检测血尿酸、肌酐、尿素氮；HE染色及PAS染色检查肾脏病理改变；免疫组化染色观察肾小球入球小动脉α-SMA表达、肾间质微血管密度(CD34表达养性)、肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和转化生长因子β(TGF-β)表达水平；TUNEL法观察肾小管凋亡情况；ELISA法检测血清XO、NADPH氧化酶、肾皮质AngⅡ浓度,Western blot法检测肾组织KLF-5、磷酸化p38MAPK蛋白表达。结果：1、RK组大鼠各时间点24小时尿蛋白、血肌酐、尿素氮均较Sham组增高(P<0.05),出现明显的肾小球增生、肥大、硬化,肾小管变性、扩张、萎缩,肾间质炎性细胞浸润,纤维化形成;肾小球入球小动脉轻度增生,管周毛细血管丢失,肾小管上皮细胞凋亡增加,TGF-β表达增加。2、RK+OA组大鼠各时间点24小时尿蛋白(12周除外)、血尿酸、血肌酐、尿素氮均较RK组增高(P<0.05),肾小球增生、硬化,肾间质纤维化明显加重；肾小球入球小动脉明显增殖,微血管密度显著下降,肾小管上皮凋亡明显增加,而增生减少,TGF-β表达明显增加。血尿酸水平与24小时尿蛋白量、血尿素氮和肌酐水平以及肾小管间质评分呈正相关性。3. RK+OA+Tea组大鼠各时间点血尿酸、尿素氮、肌酐及尿蛋白水平明显减低(P<0.05),肾小球增生及间质纤维化显著改善,肾小球入球小动脉的增殖,间质微血管的丢失明显改善,肾小管上皮细胞的凋亡明显减少而增殖增加,肾小管TGF-P的表达减少。与RK+OA+AP比较,RK+OA+Tea组大鼠的各项肾损伤指标均改善得更为明显。4、RK+OA组各时间点血清OX较RK组及Sham组增高,RK+OA+Tea组较RK+OA组明显减低(P<0.05)。5、RK+OA组各时间点血清NADPH氧化酶,肾皮质AngⅡ,肾组织磷酸化p38MAPK、KLF-5均较RK组明显增高(P<0.05)。6、RK+OA+Tea组各时间点血清NADPH氧化酶,肾皮质AngⅡ,肾组织磷酸化p38MAPK、KLF-5均较RK+OA组明显减低(P<0.05)。结论：1、成功构建了5/6肾切除合并高尿酸血症的动物模型。2、茶叶功能成分配方可显著改善5/6肾切除合并高尿酸血症大鼠肾损伤：降低其血清尿酸浓度、减轻其尿蛋白,并明显改善肾功能、减轻入球小动脉平滑肌的增殖及间质毛细血管的丢失、减轻肾小管上皮细胞的凋亡,并促进其增殖、减轻肾间质纤维化。3、茶叶功能成分配方可能通过抑制黄嘌呤氧化酶,减少尿酸生成,从而使血尿酸水平降低；通过减少AngⅡ、抑制NADPH氧化酶减轻氧化应激反应,从而减轻高尿酸血症导致的血管内皮细胞损伤；通过抑制RAS及p38MAPK信号通路活化、下调KLF-5减轻高尿酸血症导致的血管平滑肌细胞增殖,进而减轻高尿酸血症所致的肾脏损害。4、茶叶功能成分配方可作为尿酸性肾损伤的一种新的治疗选择。