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艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)引起的一种逐步摧毁人体免疫系统,严重威胁人类健康和生存的重大传染性疾病。尽管现有的高效抗反转录病毒疗法(highly active antiretroviral therapy,HAART)可以改善、提高患者的生活质量和存活时间,但是一旦停止治疗会导致血浆病毒血症迅速反弹。HIV-1以原病毒的形式在静息记忆CD4+T细胞等中的持续存在是清除HIV-1的一个障碍。潜伏感染细胞中的病毒处于转录沉默状态,难以被机体免疫系统及抗病毒药物识别、杀伤。本课题基于“shock and kill”治疗策略,利用体外HIV-1潜伏感染再激活剂筛选模型,从我国丰富的天然植物资源中筛选可以有效再激活HIV-1潜伏感染的天然产物,探索中医药再激活剂在艾滋病治疗中的应用前景。 本课题首先在Eric Verdin教授惠赠的J-Lat细胞基础上,分别选用倒置荧光显微镜观察GFP表达情况、Zeiss活细胞成像系统原位检测GFP的动态表达情况、Enspire多功能酶标仪检测GFP表达强度的动态变化情况、流式技术检测GFP阳性细胞的百分比等多种方法评价HIV-1潜伏感染的再激活现象,比较了各种检测方法的优缺点,进一步优化了HIV-1潜伏感染再激活的实验条件。之后从我国丰富的天然植物资源中,选择了巴豆、了哥王、甘遂、铁海棠和黄芫花五种天然植物,以60%或100%乙醇为溶剂,采用渗漉法对其进行了初步的分离提取,得到60%或100%乙醇粗提物。利用上述优化的HIV-1潜伏感染再激活检测体系,评价这些天然植物乙醇粗提物的再激活作用。研究结果表明,J-Lat11.1细胞对再激活剂的敏感性高于J-Lat6.3细胞和J-Lat8.4细胞。在J-Lat11.1细胞中,巴豆60%或100%醇提物、黄芫花60%醇提物的有效再激活浓度的范围广泛,五个测试浓度均有明显的再激活作用,细胞毒性均小于25%,且高剂量组的再激活率与阳性对照药相似,具有进一步研究的价值。