论文部分内容阅读
第一部分Abil蛋白在脑胶质瘤和乳腺癌组织中的表达目的：研究脑胶质瘤组织中Abil蛋白的表达及其临床意义,以及乳腺癌组织中Abil、c-Abl和WAVE2蛋白的表达及其相互关系。方法：应用免疫组化S-P法检测38例脑胶质瘤组织和7例正常脑组织中Abil蛋白的表达,以及66例乳腺癌组织和24例正常乳腺组织中Abil、c-Abl和WAVE2蛋白的表达。结果：1.脑胶质瘤组织与正常脑组织相比,Abil蛋白表达明显下降。在脑胶质瘤组织中,Abil强阳性率与组织学分级呈负相关。2.乳腺癌组织与正常乳腺组织相比,Abil和WAVE2蛋白表达明显下降,而c-Abl蛋白表达无明显下降,但有蛋白定位的改变。3.Abil强阳性率与乳腺癌组织的肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及临床分期呈负相关性,与患者年龄无关。c-Abl阳性率及WAVE2强阳性率均与乳腺癌组织的组织学分级、淋巴结转移及临床分期呈负相关性,与患者年龄及肿瘤大小无关。4.乳腺癌中Abil蛋白表达与c-Abl和WAVE2蛋白表达呈正相关。结论：1.Abil在脑胶质瘤和乳腺癌中的低表达均与不良预后因素相关。2.乳腺癌中Abil蛋白表达的变化可影响c-Abl蛋白的定位和WAVE2蛋白的表达。推测Abil在Abl/Abil/WAVE2通路中可能具有至关重要的地位。第二部分稳定转染Abil基因的脑胶质瘤细胞株的建立目的：前期研究表明脑胶质瘤组织中Abil表达明显降低,为探讨Abil与脑胶质瘤发生发展的关系,建立稳定转染Abi1基因的脑胶质瘤细胞株。方法：采用Western blot检测U251 MG、H4、U-87 MG及C6这4株脑胶质瘤细胞Abil蛋白的表达,选取表达最低的细胞株,采用脂质体法进行pEGFP-C3/Abil质粒的稳定转染。用G418筛选转染株2周后,采用单克隆化操作,将细胞接种于96孔板。最终,扩增出的单克隆细胞株用Western blot检测其Abil的表达情况。结果：1.4株脑胶质瘤细胞Abil蛋白表达都降低,其中以U251 MG细胞Abil表达为最低。2.经8周G418筛选以及Western blot鉴定,得到可稳定、较高水平表达Abil的U251 MG细胞株。结论：成功建立了稳定转染Abil基因的人脑胶质瘤U251 MG细胞株。第三部分Abil对脑胶质瘤生物学行为的影响目的：探讨Abil对脑胶质瘤生物学行为的影响,为Abil基因应用于脑胶质瘤基因治疗提供理论依据。方法：研究稳定转染Abil基因的人脑胶质瘤U251 MG细胞株的生物学行为。采用倒置显微镜和吉姆萨染色观察细胞形态。采用流式细胞术检测细胞DNA含量。采用生长实验、软琼脂克隆形成实验及Ki67标记等方法评价细胞增殖能力。采用划痕试验和迁移实验检测细胞迁移能力,采用侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果：稳定转染Abil基因的U251 MG与对照组相比,发生了以下变化：1.细胞形态向分化程度高的方向变化。2.多核细胞的比例下降。3.细胞生长曲线下移,克隆形成率和Ki67表达降低。4.细胞迁移能力上调。结论：Abil对脑胶质瘤的恶性转化可能有抑制作用。Abil可以抑制脑胶质瘤细胞增殖,上调细胞迁移能力。