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目前对黑加仑的研究主要集中在贮藏保鲜、果汁加工、营养成分等方面,而对黑加仑中活性物质及其功能特性方面尤其是对多酚免疫抗炎方面的研究和评价,鲜有报道。鉴于此,本研究以黑加仑为原料,利用超声波辅助提取方法对其多酚进行提取,使用大孔树脂吸附法进行分离纯化并对其成分分析、研究黑加仑多酚对RAW264.7细胞免疫调节作用和抗炎症作用。主要结果如下: 1.分析四个因素对黑加仑多酚(以下简写为BP)粗提物得率的影响,得到最佳提取条件为乙醇浓度70%、料液比1∶20、超声波提取时间30min、超声波提取温度40℃。用响应曲面法考察乙醇浓度、料液比、超声波提取温度三个因素以及各因素之间的交互作用对BP得率的影响效果。结果表明:三个因素对BP得率均有显著影响(P<0.05)。乙醇浓度和料液比之间的交互作用极显著(P<0.01)。对上述得到的条件进行验证BP得率为5.16%; 2.比较五种大孔树脂对BP的静态吸附和解吸能力,筛选出纯化BP的最佳树脂;结果表明:NKA-9为BP纯化的最佳树脂;选取BP的pH、浓度、流速三个因素优化NKA-9树脂对BP动态吸附性能;确定B最佳条件为样品液pH3,样品液浓度为5 mg/mL、动态吸附流速为2 BV/h。选取解吸液乙醇浓度、流速、及所用体积三个因素优化动态洗脱性能。确定最佳条件为解吸液乙醇体积分数70%、动态解吸流速2 BV/h、解吸液乙醇所用体积为200 mL。 3.利用高效液相色谱-质谱联用仪对上述提取纯化的BP进行成分鉴定。结果表明:飞燕草素-3-O-葡萄糖苷;飞燕草素-3-O-芸香糖苷;矢车菊素-3-O-葡萄糖苷;矢车菊素-3-O-芸香糖苷是BP四种为主要的花色苷,所占峰面积比重分别为3.88%,7.94%,10.75%,。于此发现杨梅酮芸香糖苷;杨梅酮葡萄糖苷;槲皮素-3-O-芸香糖苷;槲皮素葡萄糖苷;鼠李素芸香糖苷;山奈酚葡萄糖苷等7种多酚,同时也有芍药花青素-3-O-芸香糖苷;天竺葵色素-3-O-芸香糖苷这2种花色苷存在。 4.探索纯化后的BP对RAW264.7细胞免疫功能的调节作用。以BP各剂量浓度培养RAW264.7巨噬研究BP各剂量对细胞干预作用。结果表明:100、200、300、400、500μg/mL浓度作为研究免疫作用给药浓度。100、200、300、400μg/mL浓度作为抑制炎症实验给药浓度;利用细胞增殖作用、吞噬中性红实验、NO释放量测定及酶联免疫吸附(ELISA)法测定细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的含量对BP免疫调节作用进行评价。在400μg/mL浓度下,RAW264.7细胞被BP作用24h后,RAW264.7细胞增殖能力促进作用效果较好,增殖指数由1上升到1.25; BP浓度为300、400μg/mL对细胞吞噬能力促进效果显著,吞噬指数由1上升到1.23; BP浓度为200~500μg/mL时,对NO释放促进作用效果显著,由7.25μg/mL上升到11.26μg/mL;同时对细胞因子IL-1β、IL-6促进效果显著;BP浓度为400μg/mL对细胞因子TNF-α促进效果显著,分泌量为539.72 pg/mL。可以得出结论:BP对RAW264.7细胞具有提高免疫的效果,可以考虑作为一种良好的免疫增强剂而使用。 5.探索纯化后的BP对RAW264.7细胞抑制炎症作用。首先建立细胞炎症模型。然后加入相应剂量浓度的BP,通过测定NO释放量及细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的分泌量来评价BP的抗炎症效果。结果表明:浓度为100-400μg/mL的BP对RAW264.7细胞释放NO、细胞因子IL-6分泌抑制作用显著,400μg/mL对NO释放,IL-6分泌抑制效果显著;浓度为200-400μg/mL的BP对RAW264.7细胞因子分泌TNF-α、IL-1β抑制作用显著。可以考虑将其加入到食品中,起到保健功效。