四种浮萍提取物抗菌活性和黄酮含量测定

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浮萍(Lemnaceae)生长水体表面,而这些水体大多数为营养丰富的污染水,其微生物丰富,证明浮萍具有抵抗微生物的保护机制,有望成为抗菌物质活性筛选以及动植物病原菌和人类致病微生物感染机制研究的模式体系。本学位论文用不同极性的溶剂对浮萍进行提取,用牛津杯法(Oxford Cup)及最小抑菌浓度(MIC)结合生长曲线测定等方法,测定比较绿萍zh0018(Lemna minor L.)、少根紫萍zh0224(Landoltia punctata)、多根紫萍zh0003(Spirodela polyrrhiza(L.) Schleid)、多根紫萍zh0225(Spirodela polyrrhiza(L.)Schleid)四个浮萍品系提取物的体外抗菌活性。同时建立浮萍与微生物共培养体系,确定微生物浸染对浮萍生长的影响和浮萍对不同微生物表现出的抗性。另外用分光光度法结合高效液相色谱(HPLC)测定分析提取物总黄酮含量以及成分差异。最后,针对抗菌活性较强的浮萍提取物成分进行分离纯化、鉴定,采用柱层析、薄层层析(TLC)及高相液相色谱等技术分离纯化,结合显色技术、生物自显影等方法进行抗菌活性追踪,确定浮萍提取物中活性成分。主要内容和结果如下:  (1)浮萍甲醇提取物、95%乙醇提取物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、农杆菌均有不同程度的抗菌活性。其中多根紫萍zh0225甲醇提取物抗菌活性最强,其次为绿萍,少根紫萍提取物活性相对较弱,而水提取物没有明显活性。浮萍提取物各萃取相中多根紫萍zh0225乙酸乙酯萃取物活性最强,对枯草芽孢杆菌抑菌MIC为:0.78 mg/mL,其次为正丁醇萃取相:MIC为3.13 mg/mL;  (2)浮萍各提取物对于对病原菌涅斯捷连科氏菌、溶血不动杆菌、鲍曼不动杆菌等具有一定的抗菌活性,其中多根紫萍zh0225提取物及其乙酸乙酯萃取相活性最强,在100 mg/mL时对涅斯捷连科氏菌表现为极敏(++++),有望为新药开发和研究提供依据。在浮萍与微生物共培养体系中,通过定期观察测定浮萍叶片扩增数目和叶绿素含量,结果表明绿萍和少根紫萍生长状态呈不同程度的发黄或死亡,而多根紫萍生长良好,初步判断其抵抗微生物侵染能力较强,为研究其与提取物抗菌性之间的关系及其抗菌机制提供依据。  (3)分光光度法测得不同浮萍提取物总黄酮含量,其中绿萍甲醇提取物含量较高为9.8%,其次为少根紫萍甲醇提取物为8.1%。萃取物中多根紫萍zh0225乙酸乙酯相含量最高为萃取物的22.46%,其次为正丁醇萃取物17.2%。HPLC测得不同浮萍提取物黄酮成分差异较大,两株多根紫萍成分相似而含量不同。  (4)针对抗菌活性较强的多根紫萍乙酸乙酯萃取物进一步研究,通过硅胶柱层析,氯仿/甲醇体系梯度洗脱,根据极性大小将具有抗菌活性的浮萍提取物分为若干部分,并对各部分TLC生物自显影活性测试,对薄层板上的单一抑菌活性位点进行了初步纯化,并进行初步结构鉴定,通过理化性质判断和HPLC标准品标定,以及质谱、氢谱分析鉴定,初步判断其为黄酮类物质,鉴定为芹菜素8-C-葡萄糖苷。  研究表明:结合浮萍自身的特性和提取物抗菌活性的大小及黄酮含量,就研究的四种浮萍而言,筛选多根紫萍zh0225乙酸乙酯萃取相作为优良浮萍品种提取活性物质以及开展药物生产具有巨大潜力。
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