论文部分内容阅读
目的：
筛选稳定可靠的大鼠哮喘动物模型，研究培本方对大鼠哮喘模型局部气道炎症、AHR的改善作用和对整体的NEI网络调节作用，探讨培本方用于哮喘缓解期的治疗作用及机理。
方法：
1大鼠哮喘模型的建立
采用国内外公认的OVA致敏和激发造模，针对培本方临床应用于哮喘缓解期的特点进行改进。以病理组织学结果为主要判断依据(主要观察慢性气道炎症及气道重塑)，结合血涂片及BALF涂片炎性细胞计数、OVA激发引喘反应，选择本课题研究所用大鼠哮喘模型。
2不同剂量的培本方对哮喘大鼠NEI网络调节作用的研究
选用阿斯美胶囊为对照药，探讨高、中、低剂量的培本方对大鼠哮喘模型的NEI网络调节作用。所选指标为肺组织病理组织学、血涂片及BALF涂片细胞计数反映哮喘的炎症情况；支气管激发实验观察对症状的改善；血清及BALF中IFN-γ和IL-4、IL-5含量观察对Th1/Th2平衡的调节作用；血及BALF中ET、NO、NOS含量观察其调节ET/NO平衡从而影响AHR及气道炎症的作用；血浆ACTH、血清CORT、下丘脑CHR水平和肺组织GCR的蛋白表达观察对内源性GC作用途径的影响。
3培本方全方及其拆方对哮喘大鼠NEI网络调节作用的比较研究
进一步探讨培本方全方(平补气血阴阳法)与方中的拆方部分黄芪当归药对(拆方Ⅰ组，补益气血部分)和淫羊藿女贞子药对(拆方Ⅱ组，补益阴阳部分)的作用机制及差异。在实验2的基础上，着重探讨培本方对Th1/Th2平衡的调节作用。采用免疫组化法计数肺组织Th1、Th2阳性细胞数和特征性细胞因子蛋白的表达量；采用RT-PCR技术，从基因水平检测T-bet和GATA-3mRNA的表达，二者分别是Th1、Th2细胞分化的关键转录因子，以此阐明Th1/Th2类细胞的分化机制。
结果：
1大鼠哮喘模型的建立
本实验筛选所用大鼠哮喘模型造模方法为OVA(溶于氢氧化铝佐剂内)腹腔注射合皮下注射致敏SD大鼠2次(隔周一次)，以OVA雾化激发3周，缓解6天，最后以OVA雾化1次24h后处死。此哮喘模型OVA激发后引喘级数明显加重，血涂片及BALF涂片EOS数量明显增多，肺组织出现明显的支气管黏膜上皮水肿、增生，支气管黏膜上皮脱落、管腔阻塞，基层细胞增生、平滑肌增厚，EOS及其它炎症细胞浸润，杯状细胞增多，纤维化程度增高等病理改变。
2不同剂量的培本方对哮喘大鼠NEI网络调节作用的研究
(1)培本方能够有效缓解大鼠哮喘发作症状；(2)培本方能够下调血及气道内EOS数量，并改善哮喘大鼠肺组织病理形态学；(3)培本方能够下调哮喘模型血清及BALF内IL-4、IL-5水平，并能诱导IFN-γ的生成，纠正哮喘模型的Th1/Th2功能失衡；(4)培本方可下调血及BALF中ET、NO、iNOS水平，上调cNOS水平，调节ET/NO(cNOS)失衡；(5)培本方能上调CORT水平及肺组织GCR的蛋白表达；(6)NEI整体调节作用：培本方通过对CORT作用对局部Th1/Th2及ET/NO(cNOS)失衡起调节作用；培本方可能通过下调NO、iNOS水平而抑制Th2类细胞因子IL-4、IL-5的表达，调节Th1/Th2平衡。
3培本方全方及其拆方对哮喘大鼠NEI网络调节作用的比较研究
(1)通过支气管激发实验观察，培本方可有效缓解哮喘大鼠的发作症状，且全方作用优于2个拆方组；(2)培本方全方组可显著降低血涂片EOS数量，2个拆方组无此作用；培本方全方及各拆方组均可降低BALF涂片EOS计数；(3)培本方全方及其拆方可不同程度的改善哮喘大鼠的肺组织病理学改变，2个拆方组作用相近，而全方组的作用优于各拆方组；(4)培本方全方对血清和BALF内IL-5水平有明显抑制作用，但各拆方组此作用不明显；(5)培本方下调哮喘模型血清及BALF内IL-4水平的作用可能是拆方Ⅰ和拆方Ⅱ的综合作用；诱导IFN-γ生成的作用主要由拆方Ⅰ产生；(6)培本方及其拆方影响T-bet/GATA-3的作用趋势依次为培本方全方组＞拆方Ⅰ组＞拆方Ⅱ组；(7)培本方全方及各拆方组均可抑制局部ET、NO、iNOS含量，明显增高cNOS含量，从而可调节气道局部ET/cNOS失衡；(8)培本方全方及2个拆方组均可不同程度的上调CORT水平及肺组织GCR的蛋白表达。
结论：
本课题的研究结果显示培本方对慢性哮喘模型有较明显的防治作用，通过拆方研究进一步证实其作用机制及组方作用差异为：(1)培本方可有效缓解哮喘症状，改善肺组织病理形态，且全方作用优于2个拆方部分；(2)培本方可通过显著下调IL-5水平而抑制气道内EOS浸润，但各拆方组此作用不明显；(3)在蛋白、基因水平证实培本方全方及各拆方组对哮喘发病中Th1/Th2失衡具有良好的调节作用，转录水平上对T-bet/GATA-3的调节作用是培本方全方及其拆方调节Th1/Th2平衡的上游机制。调节Th1/Th2平衡的作用趋势强弱依次为培本方全方组＞拆方Ⅰ组＞拆方Ⅱ组；(4)培本方全方及各拆方组均可抑制局部ET、NO、iNOS含量，明显增高cNOS含量，可调节气道局部ET/cNOS比值从而恢复气道的舒缩功能，降低ARH；(5)保护内源性GC作用途径是培本方发挥其抗炎及免疫调节作用的机制之一。