cry11Aa4基因的克隆、表达及其在致倦库蚊中受体的初步分析

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苏云金芽孢杆菌LLP29是一株具有自主知识产权的高效杀蚊菌株,为进一步了解该菌株的杀蚊毒素,本研究成功克隆分析了LLP29含有的cry11基因,结果发现该基因和已报道的cry11Aa同源性达99%以上,是一类杀虫谱较广且毒力较高的杀蚊基因。将该基因登陆NCBI,获得登陆号XQ228567,并提交Bt命名委员会,被正式命名为cry11Aa4。原核表达并纯化Cry11Aa4杀蚊蛋白,以致倦库蚊为靶标进行生物测定,其LC50为1340ng/mL。以Cry11Aa4为抗原免疫新西兰大白兔,获得Cry11Aa4的多克隆抗体。免疫印迹试验表明,Cry11Aa4可与致倦库蚊中肠蛋白有效结合。为了分析获得的结合蛋白,构建了生物素-亲和素系统,基于生物素-亲和素的沉降试验,成功分离到了三个Cry11Aa4的结合蛋白,其分子量分别为46、52和100KDa。经质谱分析,上述蛋白分别为ATP结合蛋白、热激蛋白和未知蛋白。其中,未知蛋白可能为一种APN。本研究为深入研究毒素与受体的相互作用、毒素的作用机制及蚊子抗性产生机理提供重要基础。
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