瓜类多聚半乳糖醛酸梅抑制蛋白的诱导表达和分离纯化

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lsq_1123
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
瓜类枯萎病是由镰刀菌寄生引起的世界性土传病害,是瓜类作物的重要病害。近年来,随着瓜类栽培面积的不断扩大及设施栽培的推广,发生越来越严重。据本实验室前期研究发现,枯萎病病原能够通过细胞壁降解酶的作用致病,其病原菌在寄主体内和人工培养基上均能够产生一系列的细胞壁降解酶,这其中的多聚半乳糖醛酸酶(PG)是病原菌侵染作物的重要酶。在植物与病原菌长期相互作用的过程中,植物相应地产生了能够抑制病原菌PG活性的因子,其中以多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)为主。PGIP是一类富含亮氨酸重复的细胞壁结合蛋白,能够特异性、非竞争性地结合PG,抑制PG活性,增强植物抗病性。  本研究以6种不同枯萎病菌:甜瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.meloni,Foe)、冬瓜枯萎病菌(F.oxysporum f.sp.benincasae,Fob)、苦瓜枯萎病菌(F.oxysporumf.sp.momodicase,Fom)、节瓜枯萎病菌(F.oxysporum f.sp.chiehqua,Foh)、黄瓜枯萎病菌(F.oxysporum f.sp.cucumerinum,Fou)、香蕉枯萎病菌4号生理小种(F。oxysporum f.sp.cubense race4,Foc4)为材料,比较其培养性状差异。制备这6种枯萎病菌的PG粗酶液,使用琼脂糖平板分析PG活力的方法对其活力进行比较,发现PG活力大小为冬瓜枯萎病PG>黄瓜枯萎病菌PG>甜瓜枯萎病菌PG>香蕉枯萎病菌4号生理小种PG>节瓜枯萎病菌PG>苦瓜枯萎病菌PG。  以黄瓜(Cucurbitaceae cucumis)、苦瓜(Momordica charantia)、冬瓜(Benincasahispida)、节瓜(Benincasa hispida var.chieh-qua)、甜瓜(Cucumis melo)幼苗为材料,研究了黄瓜PGIP的诱导表达特性及在不同组织中的活性差异,发现经黄瓜枯萎病菌孢子悬浮液诱导48h时PGIP活性最高且在不同组织中PGIP活性大小为茎>叶>根。检测了5种瓜类PGIP对6种枯萎病菌粗PG的抑制作用,证实不同的PGIP能够特异性地识别不同的PG,PGIP对不同PG存在着选择性抑制。  以经病原菌诱导的黄瓜幼苗为材料进行PGIP分离纯化,通过研磨、30.75%硫酸铵分级沉淀、10kDa超滤浓缩、ConA亲和层析、CM弱阳离子交换层析等步骤分离纯化,获得了CM-3活性峰。实验中测定PGIP活性的2-氰乙酰胺法,反应灵敏、准确度高,利于对PGIP的检测。通过对离子交换层析获得的CM-3活性峰进行SDS-PAGE,电泳后在30-60 kDa的范围内只剩下4条明显的蛋白条带。此结果为进一步了解瓜类枯萎病病原侵染过程,探究PGIP抑制PG活性的机理及瓜类枯萎病防治提供了理论和实践依据。
其他文献
老年痴呆症是威胁老年健康的“四大杀手”之一,保守估计全国老年痴呆患病人数高达600万到800万。目前在中国的发病情况每年逐渐呈上升趋势,现已成为了一种使老年人死亡的非常重
目的:探讨口腔护理系统评估在对经口气管插管患者中的应用效果.方法:将60例ICU住院的经口气管插管患者随机分为对照组和实验组各30例,对照组采用常规口腔护理方法,实验组实施
目的:探讨舒适护理在剖宫产术后产妇护理中的应用效果。方法:选取我院2014年3月至2015年1月收治的剖宫产手术生产产妇122例作为研究对象,使用随机分组的方式将其分为研究组与对
目的:观察两种静脉输液加温方法对术中、术后寒战的预防作用.方法:选取我院60例择期骨科下肢手术患者,随机分为恒温箱组(A组)20例、输液加温器(B组)20例及对照组(C组)20例,A
目的 :探究在慢性病管理模式下的社区护理对冠心病患者服药依从性及自我效能的影响.方法 :抽取在我社区卫生服务中心就诊的92例冠心病患者作为研究对象,运用系统抽样法将其分
小儿腹股沟斜疝是小儿外科常见的先天性疾病,系胎儿发育过程中鞘膜腔未能及时闭塞所致[1]。以男性多见。小儿腹股沟斜疝的手术治疗方法是外科治疗的重要手段,但也是一个创伤的
目的:研究脑出血手术后偏瘫应用早期康复护理干预的肢体功能恢复效果。方法:选取2013年8月到2015年8月的脑出血偏瘫患者80例,随机分成对照组和观察组。对照组40名患者采用常规护
广播里,在某些节目播完之后,常常听到主持人这样说:如果您听得还不过瘾的话,请拨打电话××××××××,可以反复收听。显然,这是电台与电信部门联手推出的一项为民服务措
绿豆新品种VC2917A机械化栽培技术 吗 协——“一一—-”“”””—””””“”” ”””””””“”””””””””“’”
目的:对比分析无痛分娩与正常分娩的临床疗效.方法:选取2016年5月—2017年5月,到我院进行分娩的329例产妇,将产妇分为两组.对照组167例,进行正常分娩;观察组162例,进行无痛分