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梅氏新本尼登虫(Neobenedenia melleni)隶属于扁形动物门单殖吸虫纲。它主要寄生于石斑鱼、大黄鱼、高体鰤等海水鱼类的体表、鼻腔和鳃等部位,分布广泛,宿主专一性极低。梅氏新本尼登虫寄生导致的本尼登虫病能引发海水养殖鱼类的大量死亡,该病已经给我国广东、浙江和福建等地的水产养殖业造成了严重损失,日本、澳大利亚、东南亚等国的鱼类养殖业也受到一定程度的影响。 目前,梅氏新本尼登虫的研究主要集中在基础生物学和病害防治方面,其分子生物学特别是基因组学方面的研究相对滞后。我们期待通过转录组测序与分析,从分子水平去揭示梅氏新本尼登虫的生长、发育以及寄生的相关科学问题,并为今后挖掘其功能基因、疫苗候选者和潜在药物位点等打下坚实的基础,为本尼登病的防治提供新思路。 1.采集了梅氏新本尼登虫的卵、童虫以及成虫等不同发育阶段的虫体,提取它们的RNA,通过Illumina HiSeq2000测序平台进行了高通量转录组测序,通过Trinity软件的拼接和组装,获得了10998条unigene,平均长759.96 bp,N50值为1084 bp。 2.使用Blast工具将所得unigene与公共数据库NR,Swiss-Prot,GO,COG,KEGG比对(e-value≤10-5)。其中61.37%的unigene被NR数据库注释,51.22%的unigene被Swiss-Prot数据库注释,25.78%的unigene被GO数据库注释,24.35%和34.50%的unigene分别被COG和KEGG数据库注释。 3.比对NR数据库显示,梅氏新本尼登虫unigene与其分类地位较近的华支睾吸虫(2073,18.84%)、曼氏血吸虫(1345,12.23%)和日本血吸虫(1243,11.30%)的序列匹配度较高,仅少量(13条)与NCBI数据库中梅氏新本尼登虫序列相吻合。 4.COG注释结果显示,梅氏新本尼登虫unigene主要包括翻译后修饰、蛋白质折叠和分子伴侣(394条,14.72%),翻译、核糖体结构和生物发生(336,12.55%)及信号转导机制(247,9.22%)等条目;GO注释结果显示,梅氏新本尼登虫在代谢过程、细胞过程、催化活性以及连接等条目下的unigene丰富,这显示出其较为完整的代谢机制和较强的代谢能力;KEGG注释结果显示,分别有134条、20条和77条梅氏新本尼登虫unigenes与肌动蛋白细胞骨架的调控信号通路、Toll受体信号通路和Wnt信号通路密切相关,同时还有大量unigene与疾病信号通路相关。 5.对梅氏新本尼登虫unigene进行SSR分析,在全部的unigene中得到了348条SSR序列,根据得到的SSR序列进行引物设计,获得大量引物序列。