目的：探讨原代人眼 tenon’s囊成纤维细胞的离体培养，体外模拟青光眼滤过术后滤过通道瘢痕化过程，并探索p53蛋白在滤过道瘢痕化表达中的改变。　　方法：在我院眼科手术室斜视患者手术时暴露结膜囊，取 tenon’s囊组织带回实验室。采用组织块培养法体外培养原代 HTFs，免疫荧光实验鉴定细胞。使用 MTT方法测定细胞生存状态并描绘其生长曲线。选取活力较好的3-5代细胞作为实验所用细胞，TGF-β1（10ng/ml，48h)诱导HTFs活化为MFs，使用总RNA抽提试剂盒分别提取HTFs和MFs的总RNA并逆转录为cDNA，在PCR仪中进行p53基因的扩增，对扩增合成的 p53基因片段进行琼脂糖凝胶电泳，使用凝胶成像系统观察各个条带并记录。　　结果：1.用组织块贴壁法培养原代 HTFs，在倒置显微镜下可见，培养第5-10天后，组织块边缘有少量细胞游出，细胞呈椭圆形，胞核清晰可见，有少量细胞还未脱离组织块。培养2-3周后，可见组织块四周细胞密集，细胞呈典型长梭形，放射状排列在组织块周围，在瓶底其他部位，细胞生长状态也良好，呈螺旋状排列，长梭形细胞表面积较大，在细胞中央可见清晰胞核，可见颗粒物质充满于胞质内。培养3-4周时，培养瓶中可见大量细胞，有80％瓶底覆盖单层细胞，细胞生长较密集。2.细胞传代培养后，倒置显微镜下观察，细胞形态与原代细胞基本一致，呈典型长梭形，放射状或螺旋状排列，细胞增殖能力强，生长迅速，3-4天细胞既有80%融合，可再次传代培养，实验观察3-5代细胞增殖能力强，6代以后的细胞生长缓慢，活力渐渐下降，不能作为实验所用靶细胞。3.MTT法检测细胞生长状态和存活程度，测出细胞 OD值并绘出生长曲线可见，第1d-2d时，测得的 OD值增幅小，说明细胞生长缓慢，正处于潜伏期，但在第2d-6d时，测得的 OD值稳定上升，增幅较大，说明细胞生长迅速，处于对数生长期，细胞增殖能力较强。4.免疫荧光染色鉴定细胞，荧光显微镜下观察，细胞胞质内可见大量着色丝状物质，构成网状结构与细胞纵轴平行，荧光染色强阳性，胞核未着色荧光染色阴性，即原代培养的细胞波形蛋白染色呈强阳性，鉴定我们培养的细胞为HTFs。5.经过TGF-β1诱导活化后的HTFs，倒置显微镜下可见，24h后，细胞总体形态并无太大改变，与正常 HTFs形态基本一致，呈现出长梭形并放射状或螺旋状排列。48h再次观察，可见细胞形态发生较大的改变，细胞变得更加饱满，单个细胞的个头增大，胞核不清晰，胞质内颗粒物质充盈增多，细胞形态呈多角不规则形状或长梭形，细胞之间的界线不清晰且排列无序，不再呈螺旋状排列。成纤维细胞活化为了肌成纤维细胞。6.通过半定量 PCR方法观察 p53的表达。分别提取同一标本的HTFs和MFs的总RNA，在PCR中进行p53目的基因的扩增，电泳后在凝胶成像系统中显示，扩增条带均清晰可见，Marker共分为100-600bp共6条，阳性对照组（人 GAPDH）扩增的产物长度是496bp，HTFs和 MFs扩增的p53产物条带均为141bp。成像可见，HTFs扩增的反应条带比MFs扩增的反应条带更加清晰明亮，说明 HTFs中 p53蛋白的表达量比 MFs中 p53蛋白的表达量高。　　结论：经TGF-β1活化后的HTFs中p53蛋白的表达量与正常HTFs中p53蛋白的表达量相比明显下降。