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昆虫杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system),简称BEVS,自80年代问世以来,已成为生产和研究各种原核和真核蛋白的有力工具.该研究首先在小林淳和王学英(1995)构建的柞蚕核型多角体病毒表达载体pApCH Ⅰ的基础上,将pApCH Ⅰ(6.4kb)和pCR(R)2.1-p26/p10UP(4.4kb)分别用HindⅢ和Pst Ⅰ酶切,然后分离、连接pApCHI的3.7kb和pCR(R)2.1-p26/p10UP的2.7kb DNA片段,新构建了转移载体pApCHⅡ(6.4kb).新构建的转移载体pApCHⅡ主要优点是:增加了外源基因插入位点EcoRI,外源有用基因片段经PCR扩增后可直接克隆到该载体上,应用极为方便.其次又利用ApNPV P10基因的启动子,构建了转移载体pApP10-LacZ,即在质粒pBluescript Ⅱ SK-中的KpnⅠ-PstⅠ酶切位点处,插入通过系列克隆构建的含有P10基因启动子的P10基因5末端上流领域约2.6kbDNA片段和P10基因3末端下流领域约2.2kbDNA片段,在P10基因启动子之后组入来自大肠杆菌的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)基因,即构建成了转移载体pApP10-LacZ.第三,将转移载体pApCHⅡ和质粒pApP10-LacZ重组,构建了同时具有多角体基因启动子和P10基因启动子的转移载体pApCHⅢ(10kb左右).第四,分别用EcoR Ⅰ单酶切,Kpn Ⅰ和Cla Ⅰ双酶切检测转移载体pApCHⅢ的大小和双启动子的转录方向,结果证明获得两个重组质粒,一个是P10基因启动子与多角体蛋白基因启动子转录方向相同,另一个方向相反.该转移载体的突出特点是具有双启动子,多角体蛋白基因启动子后可组入外来有用基因;P10基因启动子后组入了具有选择标记的β-半乳糖苷酶基因,在筛选重组病毒时加入X-Gal后,有重组病毒的培养细胞液呈蓝色,具有明显的选择标记,即使无经验者也可选出重组病毒.